CircHIPK2-miR-124-σ-1R軸在星形膠質(zhì)細胞活化中的作用機制研究.pdf

1、目的:中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病大多伴有嚴重的神經(jīng)炎性反應，早期研究結(jié)果表明，神經(jīng)炎性反應在腦內(nèi)病理過程中起重要作用。星形膠質(zhì)細胞作為哺乳動物腦內(nèi)分布最為廣泛的細胞，在神經(jīng)炎性反應過程中扮演重要角色，但調(diào)控星形膠質(zhì)細胞活化的具體分子機制還不甚明確。本研究從競爭內(nèi)源性RNA(ceRNA)機制出發(fā)，闡明環(huán)狀RNA(circular RNA，circRNA)對microRNA(miRNA)的海綿吸附作用，進而調(diào)控星形膠質(zhì)細胞的活化過程。本研究結(jié)果不僅為

2、甲基苯丙胺所致神經(jīng)炎性反應提供潛在的治療靶點，同時也為其它神經(jīng)炎性疾病的治療提供指導意義。
　　方法:應用Western blot檢測膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)、σ-1受體(σ-1R)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激和自噬相關(guān)蛋白表達水平;應用real-timePCR檢測circular RNA HIPK2(circHIPK2)、miRNA124(miR-124)和σ-1R mRNA表

3、達水平;應用熒光素酶報告基因驗證miR-124對σ-1R mRNA的調(diào)控作用;應用RNA pull down和原位雜交共定位實驗驗證circHIPK2與miR-124存在相互結(jié)合;運用慢病毒轉(zhuǎn)染和小鼠腦微注射技術(shù)，結(jié)合Western blot和免疫熒光染色技術(shù)，在離體和整體水平上驗證circHIPK2/miR-124/σ-1R軸在星形膠質(zhì)細胞活化中的作用。
　　結(jié)果:1）σ-1R參與調(diào)控星形膠質(zhì)細胞活化;2）miR-124負調(diào)控σ

4、-1R表達;3）細胞水平上，miR-124通過靶向調(diào)控σ-1R，抑制甲基苯丙胺引起的星形膠質(zhì)細胞活化;4）整體水平上，Anti-miR-124促進野生型（wide type，WT）小鼠海馬腦區(qū)星形膠質(zhì)細胞活化，但在σ-1R敲除(knockout，KO)小鼠上未發(fā)現(xiàn)明顯差異;5）circHIPK2結(jié)合吸附miR-124;6）細胞水平上，敲低circHIPK2抑制星形膠質(zhì)細胞活化;7）整體水平上，敲低circHIPK2抑制甲基苯丙胺/脂多糖

5、(lipopolysaccharide，LPS)引起的小鼠海馬腦區(qū)星形膠質(zhì)細胞活化;8）甲基苯丙胺誘導星形膠質(zhì)細胞自噬和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的發(fā)生;9）敲低circHIPK2抑制星形膠質(zhì)細胞自噬的發(fā)生;10）敲低circHIPK2抑制星形膠質(zhì)細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的發(fā)生;11)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激促進甲基苯丙胺引起的星形膠質(zhì)細胞活化，而自噬抑制甲基苯丙胺引起的星形膠質(zhì)細胞活化;12）甲基苯丙胺引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激促進星形膠質(zhì)細胞自噬的發(fā)生，自噬抑制甲基苯丙胺引起的內(nèi)質(zhì)