CircHIPK2-miR-124-σ-1R軸在星形膠質(zhì)細(xì)胞活化中的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病大多伴有嚴(yán)重的神經(jīng)炎性反應(yīng)，早期研究結(jié)果表明，神經(jīng)炎性反應(yīng)在腦內(nèi)病理過程中起重要作用。星形膠質(zhì)細(xì)胞作為哺乳動(dòng)物腦內(nèi)分布最為廣泛的細(xì)胞，在神經(jīng)炎性反應(yīng)過程中扮演重要角色，但調(diào)控星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的具體分子機(jī)制還不甚明確。本研究從競(jìng)爭(zhēng)內(nèi)源性RNA(ceRNA)機(jī)制出發(fā)，闡明環(huán)狀RNA(circular RNA，circRNA)對(duì)microRNA(miRNA)的海綿吸附作用，進(jìn)而調(diào)控星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化過程。本研究結(jié)果不僅為

2、甲基苯丙胺所致神經(jīng)炎性反應(yīng)提供潛在的治療靶點(diǎn)，同時(shí)也為其它神經(jīng)炎性疾病的治療提供指導(dǎo)意義。
　　方法:應(yīng)用Western blot檢測(cè)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)、σ-1受體(σ-1R)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平;應(yīng)用real-timePCR檢測(cè)circular RNA HIPK2(circHIPK2)、miRNA124(miR-124)和σ-1R mRNA表

3、達(dá)水平;應(yīng)用熒光素酶報(bào)告基因驗(yàn)證miR-124對(duì)σ-1R mRNA的調(diào)控作用;應(yīng)用RNA pull down和原位雜交共定位實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證circHIPK2與miR-124存在相互結(jié)合;運(yùn)用慢病毒轉(zhuǎn)染和小鼠腦微注射技術(shù)，結(jié)合Western blot和免疫熒光染色技術(shù)，在離體和整體水平上驗(yàn)證circHIPK2/miR-124/σ-1R軸在星形膠質(zhì)細(xì)胞活化中的作用。
　　結(jié)果:1）σ-1R參與調(diào)控星形膠質(zhì)細(xì)胞活化;2）miR-124負(fù)調(diào)控σ

4、-1R表達(dá);3）細(xì)胞水平上，miR-124通過靶向調(diào)控σ-1R，抑制甲基苯丙胺引起的星形膠質(zhì)細(xì)胞活化;4）整體水平上，Anti-miR-124促進(jìn)野生型（wide type，WT）小鼠海馬腦區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化，但在σ-1R敲除(knockout，KO)小鼠上未發(fā)現(xiàn)明顯差異;5）circHIPK2結(jié)合吸附miR-124;6）細(xì)胞水平上，敲低circHIPK2抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞活化;7）整體水平上，敲低circHIPK2抑制甲基苯丙胺/脂多糖

5、(lipopolysaccharide，LPS)引起的小鼠海馬腦區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化;8）甲基苯丙胺誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞自噬和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生;9）敲低circHIPK2抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞自噬的發(fā)生;10）敲低circHIPK2抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生;11)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激促進(jìn)甲基苯丙胺引起的星形膠質(zhì)細(xì)胞活化，而自噬抑制甲基苯丙胺引起的星形膠質(zhì)細(xì)胞活化;12）甲基苯丙胺引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞自噬的發(fā)生，自噬抑制甲基苯丙胺引起的內(nèi)質(zhì)