NO-cGMP信號轉導途徑與星形膠質細胞活化增殖機制研究.pdf

1、目的：星形膠質細胞(Ast)是中樞神經系統(tǒng)(CNS)中數量最多的細胞，具有多方面的功能。Ast活化是指數量增加，膠質纖維酸性蛋白(GFAP)的表達增強，并分泌多種細胞因子和生長因子等，對神經元的存活、突起的再生和神經系統(tǒng)功能的恢復有重要的影響。如何有效調控膠質細胞活化增殖，是目前國內外學者們關注的熱點之一。本實驗旨在經體外分離、培養(yǎng)純化獲得的高純度新生鼠腦皮質星形膠質細胞，利用中藥丹參的主要成分丹參酮IIA進行干預，觀察星形膠質細胞活化

2、增殖情況。用不同的藥物，調節(jié)星形膠質細胞中cGMP濃度，觀察相應的GFAP表達強度，研究星形膠質細胞cGMP與GFAP增殖的相互關系，探討NO-sGC-cGMP信號轉導途徑與星形膠質細胞活化增殖機制。 方法：分離2天內新生SD大鼠大腦皮層細胞，用含20％新生牛血清的DMEM/F 12的培養(yǎng)基培養(yǎng)，經原代及傳代培養(yǎng)，并以GFAP-FITC免疫熒光法對所獲細胞進行鑒定。待傳代培養(yǎng)生長態(tài)勢良好時，一部分隨機分成4組，在不同時間段給予不

3、同濃度丹參酮IIA進行干預，經流式細胞儀觀察其增殖情況，另一部分隨機分成8組，經相應藥物(ODQ、IBMX)干預后，放射免疫測其cGMP濃度，同時免疫熒光測GFAP熒光強度OD值，代表GFAP表達強度，統(tǒng)計學作相關分析。 結果：原代及傳代培養(yǎng)星形膠質細胞，經GFAP免疫熒光檢測，其純度可達96％以上。實驗結果顯示：在一定的范圍內，隨著丹參酮IIA濃度增加，處于G0/G1期細胞比例下降，S+G2+M期的比例相應增加。不同濃度非特異

4、性磷酸二酷酶抑制劑IBMX抑制了cGMP的降解，使cGMP濃度增加，GFAP隨著不同濃度IBMX變化表達量也不同，相關系數為0.95。用sGC選擇性抑制劑ODQ干預后，隨著cGMP濃度降低，GFAP表達量也隨之降低，其相關系數為0.76。 結論： 1.丹參酮IIA可促進星形膠質細胞增殖活化。 2.cGMP濃度與GFAP合成呈高度正相關。結合NO-GC-cGMP信號傳導途徑，該途徑可能對GFAP的合成具有調節(jié)作用。