NK細(xì)胞活化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中KCTD9與SHB的作用研究.pdf

1、【研究背景及目的】
　　在各種病因所導(dǎo)致的肝損傷中,機(jī)體免疫介導(dǎo)所致肝細(xì)胞損傷占有重要的地位,盡管具體機(jī)制復(fù)雜,但免疫細(xì)胞的活化均是其始動因素。本研究室的前期數(shù)據(jù)首次闡述了NK細(xì)胞在病毒誘導(dǎo)的重度肝細(xì)胞損傷中至關(guān)重要。通過對比研究重型乙型肝炎和輕中度慢性乙型肝炎患者的基因表達(dá)譜,發(fā)現(xiàn)鉀離子通道相關(guān)基因KCTD9的表達(dá)與疾病的嚴(yán)重程度即肝損傷的程度高度正相關(guān),在重型肝炎患者淋巴細(xì)胞胞核中該分子高度表達(dá)。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)其表達(dá)主要在重型肝炎

2、患者肝組織和外周血NK細(xì)胞。初步體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果的顯示,該分子的高表達(dá)與NK細(xì)胞的活化和功能具有緊密聯(lián)系[1-3]。通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),該分子與新型接頭蛋白SHB分子具有緊密功能關(guān)聯(lián),而SHB分子與IL-2受體信號途徑和PI3K途徑相關(guān)[4]。據(jù)此我們提出KCTD9分子可能是NK免疫細(xì)胞活化過程中的關(guān)鍵分子之一,并可能通過SHB蛋白參與免疫細(xì)胞活化過程。本研究針對KCTD9和SHB基因構(gòu)建相對應(yīng)的標(biāo)簽質(zhì)粒,通過體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證KCTD9分子

3、和SHB分子之間是否存在功能關(guān)聯(lián),為進(jìn)一步揭示NK細(xì)胞及其表達(dá)的KCTD9分子在重型乙型肝炎肝損傷發(fā)生和發(fā)展中的作用及其作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　【研究方法】
　　利用分子克隆技術(shù)構(gòu)建在氨基端含有His標(biāo)記的His-KCTD9融合蛋白載體pHis-KCTD9和在氨基端含有FLAG標(biāo)記的FLAG-SHB融合蛋白載體pFLAG-SHB,采用HEK293T細(xì)胞、jurkat細(xì)胞及NK92細(xì)胞共轉(zhuǎn)染和免疫共沉淀法驗(yàn)證KCTD9與SHB

4、分子的相互作用。
　　【研究結(jié)果】
　　成功構(gòu)建了氨基端含有His標(biāo)記的His-KCTD9融合蛋白載體pHis-KCTD9和在氨基端含有FLAG標(biāo)記的融合蛋白FLAG-SHB的載體pFLAG-SHB。成功共轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞、jurkat細(xì)胞及NK92細(xì)胞后,采用免疫共沉淀法發(fā)現(xiàn)KCTD9與SHB分子無結(jié)合。
　　【研究結(jié)論】
　　成功構(gòu)建了pHIS-hKCTD9和pFLAG-hSHB真核表達(dá)質(zhì)粒,通過體外實(shí)