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文檔簡介
1、目的:探討轉(zhuǎn)錄因子Küppel factor4(KLF4)對小白菊內(nèi)酯(parthenolide,PN)治療乳腺癌細胞增殖敏感性的影響及可能的作用機制。
方法:通過Real-time PCR法檢測乳腺癌細胞株中KLF4表達水平,LipofectaminTM2000轉(zhuǎn)染pEGFP-KLF4,在BT549細胞中過表達KLF4,Real-time PCR和Western blot法檢測BT549過表達KLF4后KLF4 mRNA和蛋
2、白表達水平。LipofectaminTM2000轉(zhuǎn)染siRNA-KLF4,在MCF-7細胞中敲降KLF4表達,Real-time PCR和Western blot法檢測MCF-7細胞敲降KLF4后KLF4 mRNA和蛋白表達水平。CCK8法檢測細胞增殖率,觀察KLF4過表達和敲降對小白菊內(nèi)酯治療乳腺癌細胞敏感性的影響。細胞免疫熒光化學(xué)實驗檢測MCF-7細胞中P21表達,流式細胞術(shù)檢測細胞周期變化。
結(jié)果:
(1)與p
3、EGFP-control組相比,pEGFP-KLF4轉(zhuǎn)染組的BT549細胞對小白菊內(nèi)酯的敏感性明顯提高(P<0.05)。
(2)與siRNA-negative control組相比,siRNA-KLF4轉(zhuǎn)染組的MCF-7細胞對小白菊內(nèi)酯的敏感性明顯降低(P<0.05)。
(3)小白菊內(nèi)酯作用MCF-7細胞48h,細胞免疫熒光化學(xué)檢測發(fā)現(xiàn),與siRNA-negative control組相比,siRNA-KLF4轉(zhuǎn)染組
4、MCF-7細胞中P21蛋白表達明顯降低(P<0.05)。
(4)小白菊內(nèi)酯作用48h,與pEGFP-control組相比,pEGFP-KLF4轉(zhuǎn)染組BT549細胞G0-G1期細胞比例明顯升高(P<0.05);與轉(zhuǎn)染siRNA-negative control組相比,siRNA-KLF4轉(zhuǎn)染組MCF-7細胞G0-G1期細胞比例明顯降低(P<0.05)。
結(jié)論: KLF4在乳腺癌細胞中的表達水平與小白菊內(nèi)酯治療敏感性成正
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