乙型肝炎病毒表面抗原對人肝星狀細(xì)胞LX-2增殖與活化的影響.pdf

1、目的:肝纖維化是多種原因所致慢性肝病發(fā)展為肝硬化及肝癌的中間階段，其發(fā)病原因及致病機制較為復(fù)雜。目前認(rèn)為肝纖維化是各種因子如肝炎病毒、血吸蟲病、酒精、藥物及毒物等長期持續(xù)損害肝臟，組織發(fā)生修復(fù)時細(xì)胞外基質(zhì)合成與降解失衡而引起的病理變化。肝星狀細(xì)胞是纖維化肝臟中細(xì)胞外基質(zhì)的主要合成細(xì)胞，肝星狀細(xì)胞激活并轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞是肝纖維化發(fā)生發(fā)展的核心環(huán)節(jié)。各種致肝纖維化因素均把肝星狀細(xì)胞作為最終靶細(xì)胞，通過促使其轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞這一共同

2、途徑導(dǎo)致肝纖維化的形成。乙型肝炎病毒在肝纖維化的進(jìn)展中是一種高風(fēng)險因素。盡管目前普遍的觀點認(rèn)為纖維化的產(chǎn)生是由于肝臟炎癥所誘導(dǎo)的，但乙肝病毒是否直接促進(jìn)肝纖維化，至今尚不明確。本研究的目的是通過使用乙肝病毒表面抗原直接刺激目前認(rèn)為可以代替未成熟人類肝星狀細(xì)胞的LX-2細(xì)胞系進(jìn)行研究，探討乙肝病毒表面抗原是否會促進(jìn)人肝星狀細(xì)胞LX-2的增殖和提高α-平滑肌肌動蛋白及Ⅰ型膠原蛋白在人肝星狀細(xì)胞LX-2中的表達(dá)水平，進(jìn)而引起肝纖維化。尋找乙肝

3、病毒攜帶者等相對穩(wěn)定的乙肝病毒感染者形成肝硬化的可能機制。
　　 方法:(1)在體外貼壁培養(yǎng)人肝星狀細(xì)胞LX-2，用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞活性及形態(tài);(2)將對數(shù)生長期LX-2細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，待細(xì)胞貼壁后加入不同終濃度的乙肝病毒表面抗原刺激24h，用噻唑藍(lán)法測乙肝病毒表面抗原對LX-2細(xì)胞增殖的影響，并篩選出后續(xù)實驗的刺激濃度;(3)將對數(shù)生長期的LX-2細(xì)胞均勻的接種于96孔培養(yǎng)板，待細(xì)胞貼壁后，將一定濃度的乙肝病毒表面抗

4、原加入人肝星狀細(xì)胞LX-2中對其刺激，以單獨培養(yǎng)的人肝星狀細(xì)胞LX-2為對照組，培養(yǎng)24h;(4)24h后分別收集細(xì)胞上清液，用酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙肝病毒表面抗原對LX-2細(xì)胞的α-平滑肌肌動蛋白和膠原蛋白Ⅰ的蛋白表達(dá)水平的影響;(5)用SPSS18.0軟件包，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，對比實驗組與對照組的α-平滑肌肌動蛋白和膠原蛋白Ⅰ的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:(1)LX-2細(xì)胞生長活性良好，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞呈星狀，胞核呈橢圓形。(2)噻

5、唑藍(lán)法檢測結(jié)果顯示:不同濃度的乙肝病毒表面抗原均明顯抑制LX-2細(xì)胞的增殖。(3)酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測結(jié)果顯示:與單獨培養(yǎng)的LX-2細(xì)胞對照相比，加入乙肝病毒表面抗原刺激的LX-2細(xì)胞組α-平滑肌肌動蛋白在人肝星狀細(xì)胞的表達(dá)水平無明顯變化(P＞0.05)，Ⅰ型膠原蛋白在人肝星狀細(xì)胞的表達(dá)水平無明顯變化(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:(1)一定濃度乙肝病毒表面抗原抑制人肝星狀細(xì)胞的增殖。(2)乙肝病毒表面抗原對α-平滑肌肌動蛋白