乙型肝炎病毒表面抗原變異株快速診斷試劑的研制.pdf

1、目的：乙型肝炎病毒變異是目前乙肝診療中的一個(gè)突出問題。全世界乙肝病毒S基因變異率約為20％-40％；我國單純乙肝疫苗免疫后攜帶者變異率為31％。本課題的目的就是要研制能夠同時(shí)檢測乙肝表面抗原野生株和多種變異株的ELISA快速診斷試劑盒，進(jìn)一步建立完善的工藝流程，確定可行的技術(shù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)一步提高我國當(dāng)前乙型肝炎病毒(HBV)的檢出率，為臨床早期診斷、預(yù)防和控制HBV的傳播奠定新的基礎(chǔ)。 方法：進(jìn)行了乙型肝炎病毒表面抗原(HBsA

2、g)ELISA方法學(xué)研究，建立了野生株檢測免疫基本模式。利用單克隆抗體技術(shù)制備并篩選出能夠同時(shí)與野生型和突變型乙肝病毒表面抗原進(jìn)行特異性結(jié)合反應(yīng)的單克隆抗體，用ELISA方法鑒定該抗體的親和力和特異性。在基本模式基礎(chǔ)上，將該抗體與野生株抗HBs混合包被于固相載體上。通過一系列方陣滴定，找出固相單抗與液相多抗的最佳配比，優(yōu)化ELISA系統(tǒng)中其它各項(xiàng)技術(shù)條件，建立具有臨床意義的HBsAg變異株質(zhì)控品及標(biāo)準(zhǔn)，使試劑盒各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)達(dá)到國家質(zhì)量標(biāo)

3、準(zhǔn)的同時(shí)，又具有對HBsAg變異株檢測的最高靈敏度、特異性、準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性的技術(shù)性能。 結(jié)果：1.建立了乙肝表面抗原野生株診斷試劑盒的基礎(chǔ)模式，靈敏度、特異性、精密性、穩(wěn)定性均符合國家標(biāo)準(zhǔn)。 2.制備出的單克隆抗體D12，經(jīng)ELISA法鑒定，能同時(shí)與乙肝表面抗原野生株和多種變異株進(jìn)行特異性結(jié)合反應(yīng)，具有良好的親和力和特異性。 3.建立了穩(wěn)定的乙肝表面抗原變異株快速ELISA診斷試劑的工藝流程。試劑用于野生株及多種

4、HBsAg變異株的檢測，與目前常用檢測試劑的技術(shù)指標(biāo)相比，有明顯優(yōu)勢，檢出率有了很大提高。 結(jié)論：通過單克隆抗體技術(shù)，篩選出可特異識別變異表面抗原的單克隆抗體。經(jīng)ELISA鑒定，該抗體與野生型和突變型乙肝病毒表面抗原均具有良好的親和力和特異性。進(jìn)一步改進(jìn)的HBsAgELISA檢測試劑，可顯著降低表面抗原變異株的漏檢率，將更有效地預(yù)防和控制乙型肝炎的發(fā)生，并具有簡便、快速、特異、靈敏、穩(wěn)定的特點(diǎn)，可減少檢測費(fèi)用，便于推廣使用，將產(chǎn)