神經(jīng)生長因子抑制和逆轉(zhuǎn)大鼠肝纖維化的實驗研究.pdf

1、目的：肝纖維化是各種慢性肝病向肝硬化發(fā)展的必經(jīng)病理過程，其形成與發(fā)展成為影響諸多肝病預(yù)后、轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵。肝臟炎癥作為肝星狀細胞(HSC)活化的始動因素，如能有效地抑制其發(fā)展，就可以阻止HSC的活化，進而很好地預(yù)防肝纖維化的進展；肝臟在損傷因素持續(xù)刺激下，HSC被激活，其表型轉(zhuǎn)化為肌成纖維細胞，分泌大量細胞外基質(zhì)(ECM)，成為肝纖維化發(fā)生、發(fā)展的中心環(huán)節(jié)。HSC活化后其表型很難逆轉(zhuǎn)，通過凋亡使HSC數(shù)量減少可能是肝纖維化逆轉(zhuǎn)機制。神經(jīng)生長

2、因子(NGF)能夠抑制NF-κB活性而減輕炎癥反應(yīng)；另外，NGF通過其受體P75介導(dǎo)的凋亡途徑可以在不引發(fā)微環(huán)境炎癥損傷情況下使活化的HSC的數(shù)量減少。因此，NGF在抗肝纖維化中的作用逐漸為人們所重視。本實驗的目的在于研究在肝纖維化動物模型中，外源性NGF是否在活體內(nèi)有促進HSC凋亡的作用，并觀察NGF抗肝纖維化作用。 方法：選用雄性Wistar大鼠60只，體重200±30g。實驗開始，隨機將60只大鼠分成5組，正常對照組6只，

3、肝纖維化模型組30只，高劑量NGF預(yù)防組8只，低劑量NGF預(yù)防組8只，預(yù)防對照組8只。肝纖維化模型組大鼠給予尾靜脈注射人血清白蛋白，復(fù)制肝纖維化模型，高劑量及低劑量NGF預(yù)防組大鼠在注射白蛋白同時分別給予腹腔注射NGF4ug/kg·d及1ug/kg·d，預(yù)防對照組大鼠尾靜脈注射白蛋白同時腹腔注射生理鹽水。于實驗開始后第12周末每2周隨機處死2只模型組大鼠觀察肝臟病理變化，于第16周末，大鼠肝纖維化模型建成。將剩余的6只預(yù)防對照組大鼠，與

4、7只高劑量NGF預(yù)防組大鼠及7只低劑量NGF預(yù)防組大鼠一并處死，留取肝臟和血液標(biāo)本進行檢測。剩余的22只肝纖維化模型組大鼠隨機分成高劑量NGF治療組8只、低劑量NGF治療組8只、治療對照組6只。高劑量及低劑量NGF治療組大鼠分別給予腹腔注射NGF4ug/kg·d及1ug/kg·d，治療對照組大鼠給予腹腔注射生理鹽水。于治療第4周末一并處死，留取標(biāo)本。標(biāo)本分別進行以下項目檢測：①血液標(biāo)本：ALT、AST、HA、LN。②肝組織標(biāo)本：常規(guī)HE

5、和Masson染色；放免法檢測TNF-α含量；免疫組織化學(xué)染色觀察α-平滑肌激動蛋白(α-SMA)的表達；流式細胞分析儀測定α-SMA陽性細胞數(shù)。 結(jié)果：(1)實驗大鼠血ALT、AST、HA、LN，NGF預(yù)防組低于預(yù)防對照組，高劑量NGF預(yù)防組低于低劑量NGF預(yù)防組；NGF治療組低于治療對照組，高劑量NGF治療組低于低劑量NGF治療組。(2)大鼠肝內(nèi)TNF-α水平，NGF預(yù)防組低于預(yù)防對照組，高劑量NGF預(yù)防組低于低劑量NGF預(yù)

6、防組；NGF治療組低于治療對照組，高劑量NGF治療組低于低劑量NGF治療組。(3)大鼠肝臟炎癥壞死程度分級(G)，NGF預(yù)防組輕于預(yù)防對照組，高劑量NGF預(yù)防組輕于低劑量NGF預(yù)防組；NGF治療組輕于治療對照組，高劑量NGF治療組輕于低劑量NGF治療組。大鼠肝臟纖維化程度分期(S)，NGF預(yù)防組低于預(yù)防對照組，高劑量NGF預(yù)防組低于低劑量NGF預(yù)防組；NGF治療組低于治療對照組，高劑量NGF治療組低于低劑量NGF治療組。(4)大鼠肝內(nèi)α

7、-SMA表達量，NGF預(yù)防組低于預(yù)防對照組，高劑量NGF預(yù)防組低于低劑量NGF預(yù)防組；NGF治療組低于治療對照組，高劑量NGF治療組低于低劑量NGF治療組。(5)α-SMA陽性標(biāo)記細胞計數(shù)，NGF預(yù)防組低于預(yù)防對照組，高劑量NGF預(yù)防組低于低劑量NGF預(yù)防組；NGF治療組低于治療對照組，高劑量NGF治療組低于低劑量NGF治療組。 結(jié)論：NGF能預(yù)防和逆轉(zhuǎn)大鼠免疫性肝纖維化模型，且可能存在劑量依賴關(guān)系。NGF干預(yù)能夠減輕肝纖維化進