7個(gè)豬胎盤通透性相關(guān)基因的分離、定位、表達(dá)分析及其多態(tài)檢測(cè).pdf

1、豬胎兒的發(fā)育依賴于母體營養(yǎng)供給，母體和胎兒之間的物質(zhì)運(yùn)輸是通過胎盤進(jìn)行的。影響母體和胎兒之間物質(zhì)運(yùn)輸?shù)囊蛩刂饕刑ケP表面血管的密度和通透性以及胎盤面積。胎盤表面血管的生長及其調(diào)控與多種細(xì)胞因子有關(guān)。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是一個(gè)主要的促進(jìn)血管生長、舒張和增加血管通透性的調(diào)節(jié)子。VEGF基因的表達(dá)增加能夠激活其酪氨酸激酶受體VEGFR1和VEGFR2，誘導(dǎo)VEGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的下游目標(biāo)基因內(nèi)皮一氧化氮合酶(eNOS)和血管內(nèi)皮鈣粘蛋

2、白(CDH5)活性，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和增加血管通透性。本研究以人、鼠和牛的VEGF，VEGFR1，VEGFR2，eNOS，iNOS，ARRB2，CDH5基因?yàn)榛A(chǔ)，通過比較基因組學(xué)和生物信息學(xué)等方法克隆了豬VEGF，VEGFR1，VEGFR2，eNOS，iNOS，ARRB2，CDH5基因的部分cDNA序列；采用RT-PCR和熒光定量PCR方法研究了這7個(gè)基因的組織表達(dá)和時(shí)空表達(dá)規(guī)律；并且以大白豬為研究對(duì)象，采用測(cè)序和PCR-RFL

3、P等方法檢測(cè)iNOS基因的多態(tài)性及其與生產(chǎn)和繁殖性狀的關(guān)系。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.采用同源克隆和電子克隆相結(jié)合的方法克隆了豬VEGF，VEGFR1，VEGFR2，eNOS，iNOS，ARRB2，CDH5基因部分cDNA序列，提交NCBI獲得收錄號(hào)EU714324，EU714325，EU714326，EU714327，EU274294，EU714330，EU714329，推導(dǎo)出的氨基酸序列與來自EMBL和GenBank數(shù)據(jù)

4、庫的其他物種蛋白序列進(jìn)行比對(duì)，并用DNAMAN軟件對(duì)VEGF，VEGFR1，VEGFR2，eNOS，iNOS，ARRB2，CDH5基因作了進(jìn)化樹分析。
　　 2.根據(jù)基因內(nèi)含子區(qū)域設(shè)引物后利用輻射雜種板技術(shù)對(duì)VEGF，VEGFR1和VEGFR2基因進(jìn)行了染色體定位，結(jié)果表明它們分別定位在7q11-q12、11p13以及8p12區(qū)域。上述3個(gè)基因的定位結(jié)果皆與人基因組中相應(yīng)基因的染色體位置相對(duì)應(yīng)。
　　 3.利用RT-PC

5、R方法檢測(cè)了VEGF，VEGFR1，VEGFR2，eNOS，iNOS，ARRB2，CDH5基因在長白豬90d胚胎的心、肝、脾、肺、腎、肌肉、胎盤七個(gè)組織的表達(dá)水平，結(jié)果表明VEGF，VEGFR1，VEGFR2，eNOS，iNOS，ARRB2，CDH5基因在長白豬90d胚胎的心、肝、脾、肺、腎、肌肉、胎盤七個(gè)組織中均廣泛表達(dá)。
　　 4.利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)了VEGF，VEGFR1，VEGFR2，eNOS，iNOS、CD

6、H5和ARRB2基因在不同妊娠時(shí)期和不同品種豬胎盤中的表達(dá)水平差異。結(jié)果表明VEGF和ARRB2基因在長白豬妊娠33d到90d胎盤表達(dá)趨勢(shì)上調(diào)(p<0.05)；VEOF，VEGFR1，VEGFR2和eNOS基因在二花臉妊娠90d胎盤中表達(dá)水平與在長白豬妊娠90d胎盤的表達(dá)相比均顯著升高(p<0.01)，CDH5和ARRB2基因表達(dá)水平在二花臉妊娠90d胎盤中與在長白豬妊娠90d胎盤的表達(dá)相比顯著降低(p<0.01)。
　　 5.