結(jié)核相關(guān)抗原對初治結(jié)核病患者樹突狀細胞的免疫調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、目的:采用脂多糖（lipopolysaccharides，簡稱LPS）、卡介苗(bacilluscalmette-guerin，BCG)和結(jié)核分支桿菌特異性抗原Ag85b(以下簡稱Ag85b)刺激體外培養(yǎng)六天的初治結(jié)核病患者外周血來源的樹突狀細胞（dendritic cell，DCs），通過觀察DCs表面標志CD86、CD83、CD11c、HLA-DR的表達量及所分泌的細胞因子IL-12、IL-10、IFN-γ含量的變化，觀察三種抗原對

2、初治結(jié)核患者DCs免疫功能的影響的差異，尋求調(diào)節(jié)初治結(jié)核病患者外周血DCs免疫功能的最佳抗原，為開發(fā)治療結(jié)核病的新型免疫治療方法提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　1、收集石家莊市第五醫(yī)院新入院治療的初治結(jié)核病患者31例，均符合《臨床診療指南-結(jié)核病分冊》的診斷標準。收集健康體檢者26例作為正常對照組。
　　2、無菌采集結(jié)核病患者和健康體檢者外周血10ml，經(jīng)密度梯度離心分離出單個核細胞，分成四組，即:空白對照組、LPS組

3、、BCG組、Ag85b組。貼壁3h后去除非貼壁細胞，將貼壁細胞放在5％CO2、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。隔天半量換液，于第6d換液后，其中一組不加刺激物，其余三組分別采用LPS、BCG、Ag85b對細胞進行干預(yù)，第7d收集細胞。在培養(yǎng)期間觀察細胞的形態(tài)、大小及生長情況，并拍照記錄。
　　3、用流式細胞儀檢測各組DCs的CD83、CD86、HLA-DR和CD11c的表達率。
　　4、采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測各組DCs培

4、養(yǎng)上清中的IL-12、IL-10、INF-γ的含量。
　　5、應(yīng)用SPSS13.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（(x)±s）表示，組間及組內(nèi)采用單因素方差分析，P＜0.05為差別有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、各組外周血DCs形態(tài):
　　初治結(jié)核病患者DCs生長密度比正常對照組低，形態(tài)也不及正常對照組典型，經(jīng)三種抗原刺激后，各組DCs胞體飽滿，生長旺盛，具有典型樹突狀結(jié)構(gòu)。
　　2、

5、各組外周血DCs表面標志的檢測結(jié)果:
　　2.1各組DCs的CD83的表達:健康體檢者空白對照組、LPS組、BCG組和Ag85b組的外周血DCs的CD83的表達結(jié)果分別為(10.52±7.36)％、(15.01±9.01)％、(11.91±7.91)％、（11.72±6.88）％;初治結(jié)核病患者分別為（4.93±2.67）％、(11.42±9.51)％、（8.25±6.7）％、（9.16±8.78）％。初治結(jié)核病患者的空白對照組C

6、D83的表達率顯著低于健康體檢者的空白對照組(P=0.001)，健康體檢者的LPS組CD83的表達與其空白對照組比較顯著增多(P=0.042)，初治結(jié)核病患者的LPS組和Ag85b組與其空白對照組比較顯著增多(P=0.001;0.026)。
　　2.2各組DCs的CD86的表達:健康體檢者空白對照組、LPS組、BCG組和Ag85b組的外周血DCs的CD86的表達結(jié)果分別為(74.22±15.84)％、(82.98±11.57)％、

7、(75.5±15.31)％、（81±10.69）％;初治結(jié)核病患者分別為(68.47±15.23)％、(81.48±13.1)％、(75.5±15.31)％、(81±10.69)％。健康體檢者的LPS組CD86的表達與其空白對照組比較顯著增多(P=0.025);初治結(jié)核病患者中，LPS組和Ag85b組較空白對照組顯著增多(P=0.001;0.007)。
　　2.3各組DCs的HLA-DR的表達:健康體檢者空白對照組、LPS組、BC

8、G組和Ag85b組的外周血DCs的HLA-DR的表達結(jié)果分別為(84.42±12.06)％、（88.98±8.3）％、（87.34±9.4）％、(88.22±9.86)％，初治結(jié)核病患者分別為(81.77±8.37)％、(90.34±6.35)％、（85.1±7.45）％、（85.1±9.93）％。初治結(jié)核病患者LPS組與其空白對照組、BCG組和Ag85b組相比顯著增高(P＜0.001;P=0.02;0.033)。
　　2.4各組

9、DCs的CD11c的表達:健康體檢者空白對照組、LPS組、BCG組和Ag85b組的外周血DCs的CD11c的表達結(jié)果分別為(90.02±7.23)％、(89.61±8.26)％、(88.63±9.66)％、(88.87±10.47)％;初治結(jié)核病患者分別為(91.35±5.96)％、(90.54±6.34)％、(90.38±7.67)％、(91.07±6.06)％。初治結(jié)核病患者與健康體檢者各組間比較均無顯著性差異（P＞0.05）。

10、r>　　3、各組DCs細胞培養(yǎng)上清中細胞因子的檢測結(jié)果:
　　3.1各組DCs培養(yǎng)上清IL-12的含量:健康體檢者空白對照組、LPS組、BCG組和Ag85b組外周血DCs培養(yǎng)上清IL-12的含量分別為(39.00±36.78) pg/ml、(31.50±20.27) pg/ml、(33.79±26.65) pg/ml、(27.07±20.55) pg/ml;初治結(jié)核病患者分別為(30.11±28.70) pg/ml、(27.8±1

11、8.21) pg/ml、(21.94±16.70)pg/ml、(22.80±16.05) pg/ml。初治結(jié)核病患者各組間比較均無顯著性差異(P＞0.05），健康體檢者各組間比較亦均無顯著性差異（P＞0.05）。
　　3.2各組DCs培養(yǎng)上清IL-10的含量:健康體檢者空白對照組、LPS組、BCG組、Ag85b組外周血DCs培養(yǎng)上清IL-10的含量分別為(5.98±5.47) pg/ml、(11.37±11.27) pg/ml、(

12、6.67±5.65) pg/ml、(6.28±5.91) pg/ml;初治結(jié)核病患者分別為(2.13±2.01) pg/ml、(10.29±10.1) pg/ml、(1.98±1.53) pg/ml、(2.99±2.87) pg/ml。初治結(jié)核病患者空白對照組IL-10的含量顯著低于健康體檢者的空白對照組(P=0.02)，在初治結(jié)核病患者中，LPS組IL-10的含量顯著高于空白對照組、BCG組和Ag85b組(P＜0.001）;健康體檢者

13、中的LPS組含量亦均顯著高于其他三組(P=0.003;0.009;0.005)。
　　3.3各組DCs培養(yǎng)上清IFN-γ的含量:健康體檢者空白對照組、LPS組、BCG組、Ag85b組外周血DCs培養(yǎng)上清IFN-γ的含量分別為(7.02±6.41) pg/ml、(8.82±8.27) pg/ml、(11.01±10.75) pg/ml、(12.03±11.89) pg/ml;初治結(jié)核病患者分別為(6.92±5.86) pg/ml、(

14、12.45±11.86) pg/ml、(21.08±20.51) pg/ml、(15.44±14.39) pg/ml。經(jīng)三種抗原刺激后，初治結(jié)核病患者和健康體檢者IFN-γ的含量均升高，且初治結(jié)核病患者升高幅度高于健康體檢者。在初治結(jié)核病患者中，BCG組和Ag85b組IFN-γ的含量顯著高于空白對照組(P＜0.001; P=0.004)。
　　結(jié)論:
　　1、初治結(jié)核病患者免疫功能低下可能是由于DCs成熟功能顯著降低造成的。