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1、本實(shí)驗(yàn)在已構(gòu)建好的重組真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-IFNγ的基礎(chǔ)上，獲得小鼠IFNγ基因修飾的小鼠骨髓來(lái)源的DCs，擬初步觀察IFNγ基因修飾對(duì)DCs的生物學(xué)功能的影響，并以此為疫苗免疫小鼠，觀察IFNγ基因修飾DCs對(duì)荷瘤小鼠的免疫功能影響，以探討IFNγ基因修飾DCs對(duì)腫瘤的免疫治療的可行性。利用脂質(zhì)體Lipofectamine將重組真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-IFNγ轉(zhuǎn)染小鼠骨髓來(lái)源的DCs，免疫印跡分別在DCs轉(zhuǎn)染24h和4
2、8h之后檢測(cè)培養(yǎng)上清中的IFNγ和IL12p40含量，Greiss法檢測(cè)培養(yǎng)上清中的NO含量，流式細(xì)胞儀(flowcytometric，F(xiàn)CM)檢測(cè)DCs對(duì)同種異體T淋巴細(xì)胞的刺激增殖作用，MTT法檢測(cè)經(jīng)腫瘤抗原脈沖后的DCs誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞(CTL)對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷效應(yīng)；用IFNγ修飾DCs經(jīng)H22肝腹水瘤細(xì)胞凍融裂解抗原脈沖之后，預(yù)防免疫昆明(KM)小鼠，共兩次，每次間隔5d，然后給每只小鼠腹腔接種H22肝腹水瘤細(xì)胞，紀(jì)錄成瘤期和小
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