牛膝多糖、硒對小鼠胄髓來源樹突狀細胞功能的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、背景和目的：
　　 牛膝多糖(Achyranthes bidentata polysaccharides,ABPS)經(jīng)研究證實是一種的具有抗腫瘤效應(yīng)的中藥多糖；硒參與抑癌基因、癌基因的表達調(diào)控,具有誘導(dǎo)癌細胞凋亡的作用,也影響機體的免疫功能。但是牛膝多糖與硒其抗腫瘤作用是否與DC有關(guān),目前未見報道。
　　 樹突狀細胞(dendritic cell,DC)是機體免疫系統(tǒng)中最活躍、功能最強的專職抗原提呈細胞(antigen

2、presenting cell,APC),激活T細胞能力較強。主要參與T細胞依賴的體液免疫與細胞免疫,在抗腫瘤免疫應(yīng)答中起關(guān)鍵作用。
　　 腫瘤患者免疫功能低下以及腫瘤自身存在的多種免疫逃逸機制是惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要因素。因此,如何干預(yù)免疫逃逸和改善腫瘤機體免疫功能狀態(tài)是目前腫瘤治療中主要要解決的問題。而提高DC的增殖能力,促進DC的分化發(fā)育、成熟,又是提高機體的抗腫瘤能力的關(guān)鍵所在。
　　 本實驗擬觀察牛膝多糖、亞

3、硒酸鈉對小鼠骨髓來源DC的增殖、分化誘導(dǎo)、表面標志、抗原提呈功能的影響及對荷瘤小鼠的抗腫瘤作用,探討牛膝多糖、亞硒酸鈉的抗腫瘤效應(yīng),為進一步闡明牛膝多糖和硒的抗腫瘤機制提供依據(jù)。
　　 實驗方法：
　　 1.細胞培養(yǎng)實驗:昆明小鼠拉頸處死,無菌取骨髓細胞,應(yīng)用rmGM-CSF和rmIL-4體外誘導(dǎo)骨髓細胞生成DC,培養(yǎng)3d后,加入不同濃度牛膝多糖(200μg/ml、300μg/ml、400μg/ml)、亞硒酸鈉(0.02

4、μg/ml)、牛膝多糖聯(lián)用亞硒酸鈉(300μg/ml+0.02μg/ml)與DC共培養(yǎng),并設(shè)生理鹽水對照組,于第5d加凍融抗原沖擊,培養(yǎng)至第8 d收集各組DC。通過倒置顯微鏡觀察DC的形態(tài)變化；用流式細胞儀檢測其表面標志CD86、CD11a表達情況；檢測DC增殖周期;用收集到的DC與T細胞以1:50的比例混合培養(yǎng)72h,收獲T細胞,流式細胞儀檢測DC激活的T細胞DNA含量和細胞周期判斷T細胞增殖情況；檢測DC誘導(dǎo)的CTL對EC9706癌

5、細胞的殺傷效應(yīng)。
　　 2.荷瘤小鼠抗瘤實驗:昆明小鼠右腋下接種H22瘤細胞,24h后應(yīng)用不同濃度的牛膝多糖(500μg/ml、1000μg/ml、2000μg/ml)、亞硒酸鈉(20μg/ml)、和牛膝多糖聯(lián)用亞硒酸鈉(1000μg/ml+20μg/ml)左下腹腔注射,0.2mL/10g,每日1次,連續(xù)7d,并設(shè)生理鹽水對照組,用藥7d后處死各組小鼠,取瘤體、脾臟、胸腺。計算各組脾指數(shù)和胸腺指數(shù),測定腫瘤抑制率。取脾臟、瘤體做

6、病理切片觀察牛膝多糖對免疫功能的影響。
　　 3.統(tǒng)計學(xué)處理:采用統(tǒng)計軟件包SPSS10.0進行統(tǒng)計學(xué)分析,結(jié)果用(x)±s表示,多個樣本均數(shù)之間采用單因素方差分析(One-way analysis of variance,One-way ANOVA),顯著性水準為p<0.05。
　　 實驗結(jié)果
　　 1.牛膝多糖、亞硒酸鈉及兩者合用對體外培養(yǎng)的小鼠骨髓來源DC的影響。單用牛膝多糖中劑量組的DC表面分子CD86(

7、15.98±0.33)、CD11a(68.03±0.25)表達、抗原負載的DC增殖指數(shù)(36.79±O.64)、DCs致敏的T細胞增殖指數(shù)(71.22±0.57)和DC誘導(dǎo)的CTL對癌細胞殺傷活性(58.88±0.28)均高于其他組,差異有顯著性(p<0.05)。
　　 與生理鹽水對照組相比,單用亞硒酸鈉組的DC表面分子CD86(6.85±0.37)表達降低；CD11a(78.61±0.26)表達增高(p<0.05)；DCs致敏

8、的T細胞增殖指數(shù)(28.64±0.22)降低、DC誘導(dǎo)的CTL對癌細胞殺傷活性(40.22±0.22)增加,差異有顯著性(p<0.05)；但是,抗原負載的Dc增殖指數(shù)(25.20±O.28)增高不明顯(p>0.05)。
　　 與單用牛膝多糖中劑量組相比,亞硒酸鈉與牛膝多糖合用組反而降低DC表面分子CD86(9.89±0.34)表達；降低DC誘導(dǎo)的CTL對癌細胞殺傷活性(48.36±0.18),差異均有顯著性(p<0.05)；提高

9、CD11a(78.23±0.32)表達(p<0.05),提高DC增殖指數(shù)(43.08±0.35)(p<0.05):但對DCs致敏的T細胞增殖指數(shù)(58.43±0.16)改變不明顯(p>0.05)。
　　 2.與生理鹽水對照組相比,中劑量牛膝多糖能夠增加脾指數(shù)(13.10±0.31)、胸腺指數(shù)(3.18±0.16)、能夠提高荷H22肝癌小鼠抑瘤率(46.23),差異均有顯著性(p<0.05)；
　　 亞硒酸鈉不增加荷瘤小鼠

10、脾指數(shù)(9.76±0.02)、胸腺指數(shù)(2.68±0.14),反而提高荷H22肝癌小鼠瘤體重量(p<0.05)；
　　 亞硒酸鈉與牛膝多糖合用組的脾指數(shù)(11.90±0.22)、胸腺指數(shù)(2.98±0.04)、荷H22肝癌小鼠瘤抑瘤率均高于生理鹽水對照組(p<0.05)；
　　 病理切片顯示,中劑量牛膝多糖使瘤體更為明顯壞死,肉芽組織生成,脾臟紅髓數(shù)量增加；亞硒酸鈉組瘤體出現(xiàn)小灶狀壞死,脾小體數(shù)量少,體積正常。
　

11、　 結(jié)論
　　 1.中劑量ABPS顯著提高CD86,CD11a的表達,促進體外培養(yǎng)的DC增殖、分化成熟；促進DC致敏的T細胞增殖；提高DC介導(dǎo)的CTL特異性腫瘤殺傷能力；提高荷瘤小鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)和抑瘤率；
　　 2.亞硒酸鈉抑制DC的CD86的表達,促進CD11a的表達；不能明顯促進DC的增殖；抑制DC致敏的T細胞增殖；促進DC介導(dǎo)的CTL特異性腫瘤殺傷能力；降低荷瘤小鼠的抑瘤率和脾指數(shù)；增加荷瘤小鼠胸腺指數(shù)；