牛膝多糖、硒對(duì)小鼠胄髓來源樹突狀細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、背景和目的：
　　 牛膝多糖(Achyranthes bidentata polysaccharides,ABPS)經(jīng)研究證實(shí)是一種的具有抗腫瘤效應(yīng)的中藥多糖；硒參與抑癌基因、癌基因的表達(dá)調(diào)控,具有誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡的作用,也影響機(jī)體的免疫功能。但是牛膝多糖與硒其抗腫瘤作用是否與DC有關(guān),目前未見報(bào)道。
　　 樹突狀細(xì)胞(dendritic cell,DC)是機(jī)體免疫系統(tǒng)中最活躍、功能最強(qiáng)的專職抗原提呈細(xì)胞(antigen

2、presenting cell,APC),激活T細(xì)胞能力較強(qiáng)。主要參與T細(xì)胞依賴的體液免疫與細(xì)胞免疫,在抗腫瘤免疫應(yīng)答中起關(guān)鍵作用。
　　 腫瘤患者免疫功能低下以及腫瘤自身存在的多種免疫逃逸機(jī)制是惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要因素。因此,如何干預(yù)免疫逃逸和改善腫瘤機(jī)體免疫功能狀態(tài)是目前腫瘤治療中主要要解決的問題。而提高DC的增殖能力,促進(jìn)DC的分化發(fā)育、成熟,又是提高機(jī)體的抗腫瘤能力的關(guān)鍵所在。
　　 本實(shí)驗(yàn)擬觀察牛膝多糖、亞

3、硒酸鈉對(duì)小鼠骨髓來源DC的增殖、分化誘導(dǎo)、表面標(biāo)志、抗原提呈功能的影響及對(duì)荷瘤小鼠的抗腫瘤作用,探討牛膝多糖、亞硒酸鈉的抗腫瘤效應(yīng),為進(jìn)一步闡明牛膝多糖和硒的抗腫瘤機(jī)制提供依據(jù)。
　　 實(shí)驗(yàn)方法：
　　 1.細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn):昆明小鼠拉頸處死,無菌取骨髓細(xì)胞,應(yīng)用rmGM-CSF和rmIL-4體外誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞生成DC,培養(yǎng)3d后,加入不同濃度牛膝多糖(200μg/ml、300μg/ml、400μg/ml)、亞硒酸鈉(0.02

4、μg/ml)、牛膝多糖聯(lián)用亞硒酸鈉(300μg/ml+0.02μg/ml)與DC共培養(yǎng),并設(shè)生理鹽水對(duì)照組,于第5d加凍融抗原沖擊,培養(yǎng)至第8 d收集各組DC。通過倒置顯微鏡觀察DC的形態(tài)變化；用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其表面標(biāo)志CD86、CD11a表達(dá)情況；檢測(cè)DC增殖周期;用收集到的DC與T細(xì)胞以1:50的比例混合培養(yǎng)72h,收獲T細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC激活的T細(xì)胞DNA含量和細(xì)胞周期判斷T細(xì)胞增殖情況；檢測(cè)DC誘導(dǎo)的CTL對(duì)EC9706癌

5、細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。
　　 2.荷瘤小鼠抗瘤實(shí)驗(yàn):昆明小鼠右腋下接種H22瘤細(xì)胞,24h后應(yīng)用不同濃度的牛膝多糖(500μg/ml、1000μg/ml、2000μg/ml)、亞硒酸鈉(20μg/ml)、和牛膝多糖聯(lián)用亞硒酸鈉(1000μg/ml+20μg/ml)左下腹腔注射,0.2mL/10g,每日1次,連續(xù)7d,并設(shè)生理鹽水對(duì)照組,用藥7d后處死各組小鼠,取瘤體、脾臟、胸腺。計(jì)算各組脾指數(shù)和胸腺指數(shù),測(cè)定腫瘤抑制率。取脾臟、瘤體做

6、病理切片觀察牛膝多糖對(duì)免疫功能的影響。
　　 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用統(tǒng)計(jì)軟件包SPSS10.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,結(jié)果用(x)±s表示,多個(gè)樣本均數(shù)之間采用單因素方差分析(One-way analysis of variance,One-way ANOVA),顯著性水準(zhǔn)為p<0.05。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 1.牛膝多糖、亞硒酸鈉及兩者合用對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠骨髓來源DC的影響。單用牛膝多糖中劑量組的DC表面分子CD86(

7、15.98±0.33)、CD11a(68.03±0.25)表達(dá)、抗原負(fù)載的DC增殖指數(shù)(36.79±O.64)、DCs致敏的T細(xì)胞增殖指數(shù)(71.22±0.57)和DC誘導(dǎo)的CTL對(duì)癌細(xì)胞殺傷活性(58.88±0.28)均高于其他組,差異有顯著性(p<0.05)。
　　 與生理鹽水對(duì)照組相比,單用亞硒酸鈉組的DC表面分子CD86(6.85±0.37)表達(dá)降低；CD11a(78.61±0.26)表達(dá)增高(p<0.05)；DCs致敏

8、的T細(xì)胞增殖指數(shù)(28.64±0.22)降低、DC誘導(dǎo)的CTL對(duì)癌細(xì)胞殺傷活性(40.22±0.22)增加,差異有顯著性(p<0.05)；但是,抗原負(fù)載的Dc增殖指數(shù)(25.20±O.28)增高不明顯(p>0.05)。
　　 與單用牛膝多糖中劑量組相比,亞硒酸鈉與牛膝多糖合用組反而降低DC表面分子CD86(9.89±0.34)表達(dá)；降低DC誘導(dǎo)的CTL對(duì)癌細(xì)胞殺傷活性(48.36±0.18),差異均有顯著性(p<0.05)；提高

9、CD11a(78.23±0.32)表達(dá)(p<0.05),提高DC增殖指數(shù)(43.08±0.35)(p<0.05):但對(duì)DCs致敏的T細(xì)胞增殖指數(shù)(58.43±0.16)改變不明顯(p>0.05)。
　　 2.與生理鹽水對(duì)照組相比,中劑量牛膝多糖能夠增加脾指數(shù)(13.10±0.31)、胸腺指數(shù)(3.18±0.16)、能夠提高荷H22肝癌小鼠抑瘤率(46.23),差異均有顯著性(p<0.05)；
　　 亞硒酸鈉不增加荷瘤小鼠

10、脾指數(shù)(9.76±0.02)、胸腺指數(shù)(2.68±0.14),反而提高荷H22肝癌小鼠瘤體重量(p<0.05)；
　　 亞硒酸鈉與牛膝多糖合用組的脾指數(shù)(11.90±0.22)、胸腺指數(shù)(2.98±0.04)、荷H22肝癌小鼠瘤抑瘤率均高于生理鹽水對(duì)照組(p<0.05)；
　　 病理切片顯示,中劑量牛膝多糖使瘤體更為明顯壞死,肉芽組織生成,脾臟紅髓數(shù)量增加；亞硒酸鈉組瘤體出現(xiàn)小灶狀壞死,脾小體數(shù)量少,體積正常。
　

11、　 結(jié)論
　　 1.中劑量ABPS顯著提高CD86,CD11a的表達(dá),促進(jìn)體外培養(yǎng)的DC增殖、分化成熟；促進(jìn)DC致敏的T細(xì)胞增殖；提高DC介導(dǎo)的CTL特異性腫瘤殺傷能力；提高荷瘤小鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)和抑瘤率；
　　 2.亞硒酸鈉抑制DC的CD86的表達(dá),促進(jìn)CD11a的表達(dá)；不能明顯促進(jìn)DC的增殖；抑制DC致敏的T細(xì)胞增殖；促進(jìn)DC介導(dǎo)的CTL特異性腫瘤殺傷能力；降低荷瘤小鼠的抑瘤率和脾指數(shù)；增加荷瘤小鼠胸腺指數(shù)；