芳香烴受體與類風濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機制的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：比較類風濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis。RA）患者和正常對照外周血AHR(rs2066853)、AHRR(rs2292596)的基因型頻率和等位基因頻率，探討其基因多態(tài)性與中國漢族人群中RA的易感性和臨床參數(shù)的關(guān)系；通過收集RA吸煙者、口服20毫克的來氟米特（Leflunomide，LEF）RA患者外周血和用煙霧冷凝物（cirgarette smoke condensate，CSC），二噁英(2,3,7,8-t

2、etrachlorodibenzo-p-dioxin。TCDD)及LEF原型體外刺激培養(yǎng)外周血單個核細胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），檢測芳香烴受體（aryl hydrocarbon receptor，AHR）及其下游基因芳香烴受體抑制因子（AHR repressor）、細胞色素P4501A1(cytochromeP4501A1。CYPlAl)、IL-17、FOXP3 mRNA的表達水

3、平，分析吸煙影響RA發(fā)生、發(fā)展的可能原因。
　　方法：
　　第一部分：本研究共納入201例來自安徽省立醫(yī)院風濕科門診與住院的RA患者。所有病例均符合美國風濕病學會(ACR)1987年RA分類診斷標準。健康對照組來自我院體檢中心，健康對照組排除RA和其他自身免疫性疾病。詳細記錄研究對象的臨床資料，抽取所有研究對象的肘靜脈血，采用聚合酶鏈反應(yīng)-連接酶檢測反應(yīng)(PCR-LDR)技術(shù)檢測 AHR（rs2066853）和 AHRR（r

4、s2292596)基因多態(tài)性。所有數(shù)據(jù)分析均使用SPSS17.0軟件完成，檢驗水準α=0.05。
　　第二部分：選取31例RA吸煙者和31例RA非吸煙者，12例RA患者使用LEF前與之后，抽取其外周肘靜脈血、分離PBMC；選取15例RA非吸煙者且未用LEF，同時選取15例健康非吸煙者，抽取其外周靜脈血，用淋巴細胞分離液PBMC，在體外用CSC、TCDD、LEF刺激PBMC后再收集細胞；用實時熒光定量聚合酶反應(yīng)（real-time

5、PCR。RT-PCR）的方法檢測AHR、AHRR、CYP1A1、IL-17、FOXP3 mRNA水平的表達。組間mRNA表達水平差異比較采用Mann-Whitney U秩和檢驗；實驗結(jié)果和臨床參數(shù)間聯(lián)系、AHRR及CYP1A1mRNA與IL-17/FOXP3間的相關(guān)性均采用Spearman相關(guān)分析。所有數(shù)據(jù)分析均使用SPSS17.0軟件完成，檢驗水準α=0.05。
　　結(jié)果：
　　（1）AHR(rs2066853)和AHRR

6、（rs2292596)的基因型頻率分布在對照組均符合HWE定律（rs2066853對照組：χ2=0.067。p=0.795，病例組：χ2=2.539。p=0.111；rs2292596對照組：χ2=0.677。p=0.410，病例組：χ2=1.852。p=0.174)。
　?。?）RA組AHRs2066853的基因型頻率與等位基因頻率與健康對照組間相比，均差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），未發(fā)現(xiàn)AHRs2066853位點等位基因及

7、基因頻率與主要臨床特征有統(tǒng)計學關(guān)聯(lián)（P>0.05）。
　　（3）RA患者AHRR rs2292596的基因頻率與等位基因頻率與正常人群間相比較差異有統(tǒng)計學意義，攜帶等位基因G人群發(fā)病風險為正常人的2.176倍（G versus C：χ2=29.570,p=0.000,OR:2.176，95％CI:1.642-2.886），未發(fā)現(xiàn)AHRR rs2292596位點等位基因及基因頻率與主要臨床特征有統(tǒng)計學關(guān)聯(lián)（P>0.05）。
　

8、　（4）RA吸煙者PBMC中AHR、AHRR、CYP1A1 mRNA的表達水平均高于RA非吸煙者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；而健康正常人中吸煙者與非吸煙者AHR、AHRR、CYP1A1 mRNA的表達差異無統(tǒng)計學意義。
　　（5）RA吸煙者PBMC中IL-17與CYP1A1 mRNA表達成正相關(guān)，而與AHR、AHRR無明顯相關(guān)性；同時FOXP3與AHR、AHRR、CYP1A1 mRNA表達均無相關(guān)性。
　?。?）使用

9、LEF后RA患者外周血中AHR、AHRR、CYP1A1 mRNA的表達較使用前明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　?。?）體外用1mg/m l、10mg/ml CSC及1 umol/ml CSC、TCDD刺激RA患者PBMC后，檢測到AHR、AHRR、CYP1A1 mRNA的表達均明顯高于刺激前mRNA的表達（P<0.05），而用0.1umol/mlTCDD刺激PMBC后，AHR、AHRR、CYP1A1 mRNA的表達

10、無明顯升高；用LEF刺激PBMC后，AHR、AHRR、CYP1A1 mRNA的表達明顯降低，差異統(tǒng)計學意義（P<0.05）；在健康者中刺激前后三者mRNA的表達水平無明顯差異。
　　結(jié)論：
　?。?）我國漢族人群中，AHRR rs2292596基因多態(tài)性可能與RA患病的易感性有關(guān)，攜帶等位基因G可能是RA的一個危險因素。
　　（2）吸煙可能通過活化RA患者PBMC中AHR并使其高表達，進一步影響Th17細胞的分化而參與