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文檔簡介
1、雙酚A(BPA)是一種環(huán)境類激素,具有一定的生物毒性,影響生態(tài)環(huán)境并威脅人類的安全健康。雙酚A可以導致嬰幼兒早熟、孕婦流產(chǎn)、前列腺癌等,影響人體的內(nèi)分泌系統(tǒng),破壞DNA,也被認為是一種內(nèi)分泌干擾物。然而雙酚A又是一種重要并應用廣泛的有機化工原料,在生產(chǎn)和使用過程中,雙酚A會遷移到環(huán)境中,威脅人類健康。為了保障生態(tài)系統(tǒng)的安全和人類的健康,控制雙酚A在環(huán)境中的殘留,并建立雙酚A的快速檢測方法,顯得尤為重要。
本論文根據(jù)雙酚A的特定
2、結構,選擇類似物雙酚酸BVA作為半抗原,偶聯(lián)牛血清白蛋白BSA,制備完全人工免疫抗原BVA-BSA,免疫Balb/c小鼠,制備免疫脾細胞,與體外培養(yǎng)的骨髓瘤SP2/0細胞融合,并經(jīng)過間接ELISA檢測篩選和有限稀釋法亞克隆,得到陽性雜交瘤細胞株,并注射到不完全佐劑致敏的Balb/c小鼠腹腔,制備小鼠腹水,即單克隆抗體。單抗經(jīng)過辛酸-硫酸銨法純化,SDS-PAGE以及間接競爭ELISA方法鑒定,得到高特異性高靈敏度的雙酚A單克隆抗體,并用
3、于分析檢測環(huán)境樣品中雙酚A殘留量。
熒光示蹤物是由熒光素與半抗原偶聯(lián)得到。本實驗選擇三種熒光素(lysFITC、EDF、AMF)進行制備熒光標記物,其中l(wèi)ysFITC和EDF是由FITC衍生而來,三種熒光素與活化的雙酚酸的羧基結合,得到熒光素標記物,并經(jīng)過TLC分離純化和FPIA鑒定,最終篩選出BVA-AMF為該實驗的最佳熒光示蹤物,并用于建立熒光偏振免疫分析方法。
基于雙酚A單克隆抗體和熒光示蹤物成功制備的基礎上,
4、建立熒光偏振免疫分析法FPIA,用于檢測樣品中的雙酚A含量,檢測限為5.6ng/mL,IC50為140.6ng/mL,線性范圍為11.32-904.21ng/mL,相關系數(shù)R2=0.9913。并結合儀器方法HPLC和酶免方法ELISA對FPIA方法進行驗證,三種方法同時對環(huán)境水樣品做添加回收試驗,F(xiàn)PIA的回收率為87.91-114.28%,HPLC法為85.40-104.18%,ELISA法為92.60-112.70%,F(xiàn)PIA法與H
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