有機磷農藥熒光偏振及多殘留免疫分析研究.pdf

1、本文以研究建立快速檢測環(huán)境中有機磷農藥殘留的熒光偏振免疫(FPIA)分析方法和多殘留酶聯(lián)免疫(ELISA)分析方法為目標,設計合成了三種不同類結構的有機磷農藥通用人工半抗原,并通過結合載體蛋白免疫動物獲得了三種分別抗二乙氧基磷酸基、含芳環(huán)(或雜環(huán))硫代磷酸基以及二乙氧基硫代磷酸并具一直鏈芳烴的有機磷農藥的群特異性抗體。在所獲得抗體的基礎上,研究確立了二種檢測有機磷農藥的FPIA分析方法以及三種有機磷農藥多殘留ELISA分析方法。所建立的

2、方法為有機磷農藥的快速多殘留檢測提供了技術手段,并具一定的使用價值和推廣應用前景。主要研究結果如下:
　　1.確立二乙氧基磷乙酸(DEP)作為二乙氧基磷酸基團的有機磷農藥的通用半抗原,采用活性酯法制備人工免疫原(DEP-BSA),同時將DEP結合OVA得到包被原(DEP-OVA)。通過免疫動物獲得三種抗二乙氧基磷酸酯類有機磷農藥的抗血清,分別為抗血清A、B、D。三種抗血清效價測定結果分別為1︰10000,1︰5000和1︰2000

3、0。以抗血清D研究有機磷農藥ELISA檢測方法,確立最佳ELISA分析條件為:包被原濃度2μg/mL,Costar的酶標板中4℃包被過夜,抗血清的工作稀釋度是1︰20000,抗原抗體的最佳反應pH為7.0。親和性測定結果表明,其對二乙氧基磷酸基有機磷農藥有較高的親和性,在此基礎上建立了此類有機磷農藥的多殘留間接競爭ELISA方法,方法對對硫磷、嘧啶磷及敵敵畏三種農藥在0.01～10μg/mL濃度之間具有良好的檢測效果,最小檢測限分別為1

4、2.5 ng/mL,11.6 ng/mL和48.3 ng/mL。該方法對水樣中對硫磷、嘧啶磷以及敵敵畏的添加平均回收率為106.0％~110.0%。
　　2.應用上述抗對硫磷抗體A和抗體D以及熒光標記物PM-B-EDF,研究確立了檢測對硫磷的FPIA分析方法。該方法對對硫磷的檢測范圍為0.1μg/mL~100μg/mL。檢測水樣中的對硫磷,平均回收率為104.0%~108.3%,最小檢測限為0.18μg/mL。應用抗甲基谷硫磷抗體

5、MAb-Azi-110以及熒光標記物MBP-EDF2,研究確立了檢測甲基谷硫磷的FPIA分析方法。該方法對甲基谷硫磷的檢測范圍為0.1～10μg/mL。檢測水樣中的甲基谷硫磷,平均回收率為96.1%~120.0%,最小檢測限為0.148μg/mL。
　　3.研究合成了含芳環(huán)(或雜環(huán))硫代有機磷農藥的通用人工半抗原ArOP,通過重氮化法結合BSA獲人工免疫原ArOP-BSA,免疫動物獲得三種抗芳環(huán)(或雜環(huán))硫代類有機磷農藥的群特異性

6、抗血清1、2、3,三種抗血清的效價分別為1︰40000、1︰80000和1︰40000?？寡宓挠H和性測定結果表明,其對芳環(huán)(或雜環(huán))硫代有機磷農藥具有高度的親和性。以抗血清2建立的用于檢測此類有機磷農藥的多殘留間接競爭ELISA分析方法,該方法對對硫磷及二嗪磷的檢測范圍為0.05μg/mL~10μg/mL,最小檢測限分別為0.023μg/mL和0.029μg/mL對水中的對硫磷及二嗪磷檢測,添加回收率為96.0%~106.4%。

7、>　　4.通過結合O,O-二乙基硫代磷酰氯和4-氨基丁酸合成二乙氧基硫代磷酸基團并具一直鏈芳烴的有機磷農藥的通用人工半抗原DENP,采用碳二亞胺法結合BSA獲得免疫原DENP-BSA,免疫動物獲得該類有機磷農藥的群特異性抗血清,其效價為1︰50000。抗血清的親和性測定結果表明,其對二乙氧基硫代磷酸基團并具一直鏈芳烴的有機磷農藥具有高度的親和性。所建立用于檢測此類有機磷農藥多殘留間接競爭ELISA分析方法,對內吸磷和甲拌磷的檢測范圍為0