有機磷農(nóng)藥殘留酶聯(lián)免疫直接競爭檢測技術(shù)的研究.pdf

1、農(nóng)藥殘留是危害食品安全的重要因素之一，其中有機磷農(nóng)藥是目前使用最為廣泛的一類農(nóng)藥，約占農(nóng)藥總使用量的70％，因此對有機磷農(nóng)藥的檢測是食品安全檢測的重要內(nèi)容。目前用來檢測有機磷農(nóng)藥的方法主要是氣相色譜(GC)和高效液相色譜(HPLC)，這些方法前處理步驟復雜，費時費力，設備昂貴，需要專業(yè)人員操作，適宜實驗室檢測，不適宜大量樣品現(xiàn)場快速檢測。 酶聯(lián)免疫吸附分析(Enzyme-linked immunosorbent assay，EL

2、ISA)方法快速、靈敏、選擇性好，具有檢測成本低，操作簡便，安全可靠等優(yōu)點，同時還適宜痕量物質(zhì)的檢測。近年來，有關(guān)農(nóng)藥的免疫檢測方法已有一些報道，但多數(shù)為間接酶聯(lián)免疫法。因此本實驗研究直接競爭酶聯(lián)免疫分析方法檢測有機磷農(nóng)藥的技術(shù)，旨在用一步抗原抗體反應，快速的檢測半抗原，方法簡便，靈敏度高。 本論文選取國家明令禁止使用的甲胺磷、甲基對硫磷、對硫磷三種高毒、高殘留的有機磷殺蟲劑為研究對象。根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點，首先合成了農(nóng)藥的半抗原，然

3、后將半抗原與載體蛋白牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)合成免疫原和酶標抗原。 用合成的免疫原免疫兔子后獲得多克隆抗體，用間接ELISA測定三種抗體的效價分別為1：4000、1：4500、1：6000。并且與其他主要的有機磷農(nóng)藥進行交叉反應試驗，試驗表明交叉反應率都很低。通過直接競爭ELISA檢測，確定甲胺磷、對硫磷、甲基對硫磷包被原(即抗體)和酶標抗原的最佳工作濃度分別為1：2000、0.001mg/mL，1：3000