基于仿生酶聯(lián)免疫分析技術(shù)快速檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥多殘留研究.pdf

1、農(nóng)藥的廣泛應(yīng)用在作物增產(chǎn)保質(zhì)，提高資源利用率等方面起到關(guān)鍵作用，但濫用農(nóng)藥造成的土壤、水體污染以及對(duì)生命體造成的健康影響問題不容小覷。有機(jī)磷農(nóng)藥品種繁多，田間復(fù)配使用現(xiàn)象普遍，單種農(nóng)藥逐一檢測(cè)耗時(shí)費(fèi)力。免疫分析技術(shù)檢測(cè)農(nóng)藥殘留具有檢測(cè)靈敏度高，迅速簡(jiǎn)便等優(yōu)勢(shì)，適合應(yīng)用于有機(jī)磷農(nóng)藥多殘留快速現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。
　　本實(shí)驗(yàn)結(jié)合分子印跡技術(shù)和酶聯(lián)免疫分析技術(shù)，建立了蔬菜中多種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)新方法。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)設(shè)

2、計(jì)合成有機(jī)磷農(nóng)藥通用半抗原，制備酶標(biāo)半抗原。有機(jī)磷農(nóng)藥中間體O，O'-二甲基硫代磷酰氯與4-氨基丁酸在堿性條件下反應(yīng)，后通過萃取等步驟得到有機(jī)磷農(nóng)藥通用半抗原4-（二甲氧基硫代磷酰胺基）丁酸。采用MHS-DCC活潑酯法，將4-（二甲氧基硫代磷酰胺基）丁酸與辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)形成酶標(biāo)半抗原。
　　(2)仿生抗體的合成。采用分子印跡技術(shù)本體聚合法，在96孔酶標(biāo)板上直接聚合形成親水性仿生抗體。通過電鏡掃描，熱重分析實(shí)驗(yàn)，證明合

3、成的水相分子印跡膜具有光滑平整的表面及良好的熱穩(wěn)定性。
　　(3)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，建立快速檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥多殘留的仿生酶聯(lián)免疫新方法。對(duì)影響仿生酶聯(lián)免疫分析方法的條件進(jìn)行了系統(tǒng)優(yōu)化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)酶標(biāo)半抗原稀釋5000倍，敵百蟲在pH值為7.37的5％甲醇PBS緩沖液的條件下，該BELISA方法的靈敏度(IC50)和最低檢測(cè)限(LOD，IC15)分別為12.0mg L-1和8.0μg L-1。在酶標(biāo)半抗原稀釋5000倍，pH值為6.