人臍帶沃頓膠間充質(zhì)干細(xì)胞對重型再生障礙性貧血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及Foxp3影響.pdf

1、目的：研究臍帶沃頓膠間充質(zhì)干細(xì)胞(wharton’s jelly mesenchymal stem cells，WJCs)對重型再生障礙性貧血(severe aplastie anemia，SAA)患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及Foxp3基因表達水平的影響，探討WJCs對SAA患者T淋巴細(xì)胞(T lymphocytes，TLCs)免疫調(diào)節(jié)作用的可能機制。
　　 方法：采用膠原酶消化法從人臍帶中分離培養(yǎng)WJCs，通過流

2、式細(xì)胞術(shù)檢測其表面標(biāo)記并進行鑒定；采用密度梯度離心法及尼龍棉柱法從SAA患者外周血中分離TLCs；在植物凝集素(phytohemagglutinin，PHA)刺激下，將SAA患者TLCs(1×105個)進行體外培養(yǎng)，實驗組加入不同數(shù)量級WJCs(1組：1×103個、2組：1×104個、3組：1×105個)共培養(yǎng)，3d后采用MTT(methyl thiazolyltetrazolium)法檢測淋巴細(xì)胞抑制率；流式細(xì)胞儀檢測實驗組及正常對照

3、組SAA患者TLCs中CD4+CD25+T細(xì)胞比例的變化；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)方法檢測實驗組及正常對照組SAA患者TLCs中Foxp3基因mRNA水平的變化。
　　 結(jié)果：(1)傳代至第3代的WJCs形態(tài)呈長梭形的典型改變，流式細(xì)胞術(shù)檢測WJCs細(xì)胞表面抗原，結(jié)果顯示高表達CD166、CD29、CD13、CD44，低表達

4、CD34、CD45、HLA-DR，綜合分析結(jié)果經(jīng)過培養(yǎng)傳代所獲得細(xì)胞確為間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)。(2)WJCs與SAA患者的TLCs按1:1(1組)、1:10(2組)、1:100(3組)的比例，混合培養(yǎng)72h后，實驗組與對照組比較，TLCs的增殖受到不同程度的抑制，抑制率分別為62.9±11.9％、44.8±9.6％、2.64±7.2％，三組間比較存在明顯差異(均P<0.05)，1組抑制作

5、用最強，2組次之，3組幾乎無抑制作用。提示W(wǎng)JCs對TLCs增殖的抑制作用呈細(xì)胞劑量依賴性。(3)實驗組WJCs與TLCs共培養(yǎng)72h后，其CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞百分率較對照組顯著升高(P<0.05)；其百分率分別為22.46±3.05％、18.35±2.78％、11.88±1.54％，WJCs濃度越高，CD4+CD25+T細(xì)胞比例升高越明顯，WJCs各組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。WJCs可提高SAA

6、病人CD4+CD25+T細(xì)胞比例，且提高程度與WJCs數(shù)量呈劑量依賴性。(4)實驗組WJCs與TLCs共培養(yǎng)72小時后，SAA患者TLCs Foxp3 mRNA表達水平均高于對照組(P<0.01)，F(xiàn)oxp3 mRNA表達水平分別為1.75±0.21、1.07±0.14、0.63±0.11。實驗組WJCs濃度越高Foxp3 mRNA表達水平升高越明顯，WJCs各組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，WJCs可提高SAA病人Foxp3m