人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合脫細(xì)胞處理的人臍帶沃頓膠取向支架體外構(gòu)建組織工程軟骨.pdf

1、目的：
　　探討hUCMSCs的分離及培養(yǎng)方法并觀察其表面抗原，明確其作為組織工程種子細(xì)胞的可行性。同時(shí)，利用脫細(xì)胞處理的人臍帶沃頓膠及脫細(xì)胞處理的沃頓膠與其他材料混合制備出不同的軟骨組織工程支架并對(duì)其開(kāi)展檢測(cè)，觀察其作為軟骨組織工程支架的可行性，再次將hUCMSCs與各種不同支架復(fù)合誘導(dǎo)分化體外構(gòu)建組織工程軟骨。
　　方法：
　　經(jīng)由產(chǎn)婦及其家屬知情同意后，取足月、剖腹產(chǎn)健康產(chǎn)婦的臍帶，分離得到人臍帶沃頓膠（Whar

2、ton jelly），采用組織塊貼壁法分離培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞；將人臍帶沃頓膠脫細(xì)胞處理后，利用其與其他材料混合制備出不同的軟骨組織工程支架，并對(duì)各組支架開(kāi)展檢測(cè)；分組對(duì)干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化：A組干細(xì)胞聚集成團(tuán)誘導(dǎo)分化，B組干細(xì)胞與沃頓膠支架誘導(dǎo)分化，C組干細(xì)胞與復(fù)合支架誘導(dǎo)分化，然后對(duì)誘導(dǎo)后21天的結(jié)果分別進(jìn)行HE染色、甲苯胺藍(lán)染色、Ⅱ型膠原免疫熒光染色、實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)，觀察最優(yōu)分化組。
　　結(jié)果：
　　1、分離

3、得到的hUCMSCs數(shù)量充足，形態(tài)均一，經(jīng)檢測(cè)單純脫細(xì)胞處理的沃頓膠支架及復(fù)合支架在以下檢測(cè)中均符合組織工程支架的要求。
　　2.經(jīng)過(guò)21天誘導(dǎo)培養(yǎng)，三組均能分化出具有一定彈性和硬度的組織塊，其中，A組組織塊較小，且硬度及彈性在三組中最差，C組組織塊體積最大，B組次之。
　　蘇木精-伊紅染色見(jiàn)三組中均有細(xì)胞基質(zhì)分泌，但C組表達(dá)最好，A、B組稍差。
　　甲苯胺藍(lán)染色見(jiàn)C組中大量細(xì)胞質(zhì)被染成藍(lán)色，提示強(qiáng)陽(yáng)性，B組次之，提示

4、陽(yáng)性表達(dá)，A組最差。
　　Ⅱ型膠原免疫熒光染色見(jiàn)三組中細(xì)胞核呈淡藍(lán)色熒光，細(xì)胞質(zhì)呈紅色熒光，C組中有較多紅色熒光提示強(qiáng)陽(yáng)性，B組次之，提示陽(yáng)性表達(dá)，A組最差。
　　定量RT-PCR檢測(cè)示Aggrecan和Ⅱ型膠原在A、B、C組中均有表達(dá)，其中，C組表達(dá)結(jié)果最高，且較A、B均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），B組表達(dá)結(jié)果次之但明顯好于A組，與A組亦存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　經(jīng)過(guò)脫細(xì)胞處理的人臍