人參二醇促進(jìn)再生障礙性貧血小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及調(diào)節(jié)免疫的作用.pdf

1、目的：
　　觀察自行提取分離的人參二醇對(duì)免疫介導(dǎo)型再生障礙性貧血（再障）小鼠的療效，促進(jìn)再障小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）的增殖，及對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群的免疫調(diào)節(jié)作用。
　　方法：
　?、偃撬栀N壁法培養(yǎng)骨髓MSC，觀察原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞形態(tài)、增殖狀況，及形成成纖維祖細(xì)胞集落(CFU-F)的能力。
　?、诓捎贸晒羌?xì)胞、脂肪細(xì)胞培養(yǎng)體系，誘導(dǎo)充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞和成脂肪細(xì)胞分化，并分析骨髓MSC細(xì)胞免疫表型。
　

2、　③將MSC與同種異體小鼠胸腺T淋巴細(xì)胞分別按1:25、1:50、1:100比例，共同培養(yǎng)7d，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞表達(dá)的變化。
　?、躆TT法檢測(cè)不同濃度人參二醇5、10、25、50、100mg/L體外促進(jìn)MSC增殖的作用。
　?、莶捎妹庖呓閷?dǎo)法建立Babl/c小鼠再障模型，治療分7組，正常組、模型組、人參二醇低、中、高劑量組，陽(yáng)性對(duì)照復(fù)方皂礬丸和環(huán)胞菌素A組，均灌胃治療14d。
　?、拗委?/p>

3、后小鼠的一般情況，計(jì)數(shù)外周血白細(xì)胞、血小板，骨髓病理切片造血組織增生狀況。
　　⑦再障小鼠骨髓CFU-F集落生成的試驗(yàn)，及人參二醇促進(jìn)增殖的作用。人參二醇治療后各組小鼠骨髓細(xì)胞形成CFU-F集落的變化。
　?、嘀委熀蟾鹘M外周血CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞比值的變化。
　　結(jié)果：
　?、倥囵B(yǎng)后MSC原代貼壁細(xì)胞形態(tài)不均一，可見梭形、圓形、三角形細(xì)胞。傳代細(xì)胞形態(tài)趨于均一，以梭形為主，CD44、CD29表達(dá)陽(yáng)性，CD

4、45表達(dá)陰性；成骨培養(yǎng)體系誘導(dǎo)14d后茜素紅染色可見大量鈣化沉淀于胞外基質(zhì)，成脂培養(yǎng)體系誘導(dǎo)21d后油紅“O”染色可見大量橙紅色脂肪滴。
　?、贛SC與同種異體小鼠胸腺 T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)， CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞均明顯低與對(duì)照組，提示MSC對(duì)CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞有抑制。
　?、跰TT測(cè)定顯示人參二醇體外具有促進(jìn)MSC增殖的作用，且呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)依賴關(guān)系。
　?、茉僬闲∈笸庵苎陌准?xì)胞、血小板數(shù)量急劇下降，

5、骨髓病理切片造血細(xì)胞減少，造血組織被大量的脂肪組織代替，提示造模是成功的。
　?、萑藚⒍贾委?、10、14d，再障小鼠的外周血白細(xì)胞、血小板數(shù)均顯著高于模型組。
　　⑥再障模型小鼠骨髓的CFU-F集落數(shù)明顯低于正常小鼠，而人參二醇各治療組的CFU-F集落數(shù)量均明顯高于模型組。
　?、咴僬闲∈篌w內(nèi)T淋巴細(xì)胞亞群比例失調(diào)，CD4+/CD8+細(xì)胞比例倒置。人參二醇各治療組能夠顯著地降低再障異常增高的CD8+細(xì)胞數(shù)，提高CD

6、4+細(xì)胞數(shù)，而恢復(fù)CD4+/CD8+細(xì)胞比值。
　　結(jié)論：
　　人參二醇不但在體外能夠有效地促進(jìn)小鼠骨髓MSC增殖，而且對(duì)再障小鼠體內(nèi)病態(tài)造血狀態(tài)的MSC也同樣具有促進(jìn)增殖作用，從而起到改善造血微環(huán)境的作用。人參二醇通過有效刺激骨髓粒系、紅系和巨核系三系造血祖細(xì)胞增殖，促進(jìn)再障小鼠的血細(xì)胞生成，升高外周血白細(xì)胞和血小板數(shù)。免疫調(diào)節(jié)作用是能夠顯著地降低再障異常增高的CD8+細(xì)胞數(shù)，提高CD4+細(xì)胞數(shù)，而恢復(fù)CD4+/CD8+細(xì)