骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療再生障礙性貧血的機制研究.pdf

1、目的：探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療再生障礙性貧血的機制。 方法：(1)體外分離培養(yǎng)正常人和再障患者的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，觀察其形態(tài)學(xué)的差異，同時用流式細(xì)胞儀檢測其分子表面抗原以及PCR法檢測成脂肪細(xì)胞的差異。(2)提取56例再障患者的骨髓單個核細(xì)胞按發(fā)病機制進行分組培養(yǎng)。(3)①用正常骨髓MSC與再障的MNC共孵育，每周計數(shù)總細(xì)胞數(shù)，集簇、集落數(shù)，進一步分析增殖動力學(xué)。②用正常骨髓：MSC與再障的T細(xì)胞共孵育，流式細(xì)胞儀檢測T細(xì)胞表面

2、抗原和T亞群的變化，以及與免疫相關(guān)的細(xì)胞因子IL-2，IL-4，IL-10、IFN-γ、TNF-α、TGF-β六種細(xì)胞因子的基因(RT-PCR法)和蛋白(ELISA法)兩個水平在共孵育前后表達(dá)的變化。(4)正常骨髓MSC輸注再生障礙性貧血小鼠模型中，觀察其一般狀況、骨髓、脾臟病理組織的改變。 結(jié)果：1、(1)正常組和AA組MSC細(xì)胞形態(tài)和表面標(biāo)志無明顯差別。(2)體外AAMSC向脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化較正常組早。 (3)AA-BMSC

3、s表面有mIL-15的異常表達(dá)。2、AA發(fā)病機制分組結(jié)果屬干細(xì)胞缺陷組14例(28％)，免疫介導(dǎo)組27例(44.8％)，微環(huán)境缺陷組15例(24.1％)。3、正常骨髓MSC能夠支持從紅系集落、粒-單系集落、HPP-LCFC集落的增殖。4、(1)AA患者外周血Treg細(xì)胞數(shù)量減少，提示AA屬于自身免疫病。(2)AA患者外周血T細(xì)胞長期表達(dá)CD69，提示AA T細(xì)胞處于預(yù)激活狀態(tài)。(3)AA外周血T淋巴細(xì)胞與正常骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)T細(xì)胞

4、的生長曲線以及淋巴細(xì)胞增殖率均下降。(4)AA外周血T淋巴細(xì)胞與正常骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)后，T細(xì)胞的表面標(biāo)志Annexin-V無變化，而CD8表達(dá)下降，CD4/CD8回升。(5)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞下調(diào)AAIL-2、IFN-γ、TNF-α的表達(dá)，同時上調(diào)IL-4、IL-10、TGF-β 1 的表達(dá)，從而調(diào)節(jié)AA紊亂的免疫。5、(1)聯(lián)合應(yīng)用3.0GY <'60>CO-γ線照射全身一次照射后，第4d，5d，6d ipCY 50.0 mg/k

5、g和CH 62.5 mg/kg，小鼠外周血HB，WBC，PLT及造血器官病理檢查均符合AA標(biāo)準(zhǔn)，模型建立成功。(2)造模后，加用正常骨髓MSC可使WBC，PLT，HB的回升，修復(fù)骨髓和脾臟的病理結(jié)構(gòu)，提高造血功能。 結(jié)論：1、正常組和AA組MSC細(xì)胞形態(tài)和表面標(biāo)志無明顯差別，但體外AAMSC易成脂性和表面有：mIL-15的異常表達(dá)可能參與了再生障礙性貧血的發(fā)生。2、再生障礙性貧血是一種T細(xì)胞異常激活的自身免疫性疾病。3、正常骨髓