LTB4相關(guān)通路及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化對肺移植后閉塞性細(xì)支氣管炎的作用.pdf

1、第一部分:LTB4和孟魯司特鈉在大鼠氣管移植后閉塞性細(xì)支氣管炎中的作用
　　目的:孟魯司特鈉是一種新型的LTB受體拮抗劑。研究發(fā)現(xiàn)孟魯司特鈉具有一定的抗炎效果，有明顯的支氣管擴張作用。但到目前為止尚無文獻報道孟魯司特鈉在肺移植方面的作用。本實驗通過對不同干預(yù)因素作用下的大鼠氣管移植后全身及局部炎癥表現(xiàn)，及對移植氣管中相關(guān)蛋白的表達(dá)情況進行比較，研究藥物孟魯司特鈉對大鼠異位氣管移植術(shù)后移植氣管的作用及機理。
　　方法:我們將受

2、體大鼠進行氣管異位移植術(shù)后分為孟魯司特鈉組（實驗組）、地塞米松組（陽性對照組）和生理鹽水組（陰性對照組），分別給予孟魯司特鈉混懸液(3 mg/kg·d)、地塞米松(1 mg/kg·d)和生理鹽水（2ml/kg·d）灌胃4周后處死檢測受體血清細(xì)胞因子濃度，行HE染色和Masson染色觀察移植氣管的組織結(jié)構(gòu)，對氣管閉塞程度進行評分;并且用免疫組化染色檢測CASP1、NOX4、PAK CAT、LT4R1的表達(dá)。
　　結(jié)果:我們發(fā)現(xiàn)陰性對

3、照組移植氣管鏡下形態(tài)明顯異常，表現(xiàn)為炎癥細(xì)胞浸潤，支氣管壁增生活躍，管腔明顯同心或偏心性狹窄或閉塞;實驗組及陽性對照組移植氣管組織結(jié)構(gòu)較陰性對照組完整，實驗組、陽性對照組、陰性對照組移植氣管閉塞率分別為54.46±29.84％、72.01±26.41％、72.63±33.71％。實驗組血清中LTB4、TGF-β水平較陽性對照組和陰性對照組均有不同程度下降。實驗組的移植氣管中LT4R1、NOX4、PKA CAT和CASP1高表達(dá)的比例分別

4、為42.86％，61.90％,66.67％和52.38％，分別都低于陰性對照組的水平，并且4個蛋白免疫組化定性表達(dá)呈正相關(guān)。
　　結(jié)論:根據(jù)上述研究，我們認(rèn)為通過建立異基因大鼠氣管異位移植模型，發(fā)現(xiàn)孟魯司特鈉可以控制體內(nèi)全身及局部的炎癥反應(yīng)，保護大鼠氣管異位移植術(shù)后長期移植氣管組織結(jié)構(gòu)，可降低氣管移植后閉塞性細(xì)支氣管炎的發(fā)生率。
　　第二部分:上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化在肺移植后閉塞性細(xì)支氣管炎中的作用
　　目的:研究表明上皮-間

5、質(zhì)轉(zhuǎn)化參與了多種氣道重構(gòu)性疾病的過程。我們認(rèn)為上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化可能在肺移植后閉塞性細(xì)支氣管炎有重要作用。本實驗比較小氣道上皮細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白在肺移植大鼠肺組織中的表達(dá)情況，探索肺移植后閉塞性細(xì)支氣管炎與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的關(guān)系。
　　方法:我們成功建立同種和異基因大鼠左肺原位移植模型，實驗組是將Fisher344大鼠的左肺移植至Lewis大鼠左側(cè)胸腔，對照組是將Lewis大鼠的左肺移植至Lewis大鼠左側(cè)胸腔;移植術(shù)后給予環(huán)孢

6、菌素抗急性排斥治療，術(shù)后第28天用脂多糖氣管內(nèi)注射誘導(dǎo)閉塞性細(xì)支氣管炎;術(shù)后第90天將移植受體處死取肺，進行HE染色和Masson染色對肺組織結(jié)構(gòu)進行觀察評分，免疫組化檢測Vimentin、E-cadherin等相關(guān)蛋白在移植肺組織中的表達(dá)水平，并分析受體血清TGF-β及TNF-α的濃度。
　　結(jié)果:該方法成功建立了大鼠肺移植后閉塞性細(xì)支氣管炎的模型。異基因移植物Vimentin和mTOR術(shù)后表達(dá)陽性率明顯高于同種移植。肺組織纖維

7、化程度在異基因移植物中的評分明顯高于對照組，P＜0.01，并且與Vimentin、E-cadherin和mTOR蛋白表達(dá)陽性率呈正相關(guān);實驗組血清中TGF-β水平較對照組升高，P＜0.05。
　　結(jié)論:本實驗建立的大鼠肺移植模型可觀察到移植肺閉塞性細(xì)支氣管炎，移植后肺組織上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白表達(dá)改變，提示上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子通路的激活可能參與了肺移植后閉塞性細(xì)支氣管炎的發(fā)生和轉(zhuǎn)歸，抑制或改變上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生可能可降低肺移植