減壓法皮蛋中ACE抑制肽分離與體內(nèi)活性研究.pdf

1、皮蛋，作為我國傳統(tǒng)再制蛋品之一，據(jù)記載具有去火、降血壓效果，目前，從醋蛋中直接提取和采用酶解法酶解鮮蛋品或蛋白粉制備血管緊張素酶(ACE)抑制肽研究較多，但皮蛋中ACE抑制肽研究較少。
　　本研究以減壓法皮蛋(Decompression preserved eggs，DPE)為原料，與常壓法皮蛋(Normal pressure method preserved eggs，NPE)對比，分析皮蛋基本指標(biāo)和蛋白質(zhì)降解情況，采用直接提取

2、法提取皮蛋蛋清高活性ACE抑制肽，通過凝膠色譜分離結(jié)合二級質(zhì)譜確定5條ACE抑制肽，并將提取后的多肽灌胃原發(fā)性高血壓(SHR)大鼠，表現(xiàn)出降壓活性。
　　減壓法皮蛋的制備:采用正交分析法分別以蛋清、蛋黃中非蛋白氮含量為觀測指標(biāo)，得到最優(yōu)組合均為A3B3C2，NaOH含量4.2％、鹽含量5.5％、硫酸銅含量0.40％，為真空減壓法加工皮蛋的最佳工藝條件。加工過程中， DPE水分總含量略高于NPE，DPE和NPE蛋清中pH值相近，NP

3、E蛋黃中pH值略高于DPE，鹽含量總量變化整體趨勢一致，均呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢，DPE中游離氨基酸總量略高于NPE。皮蛋總氮含量逐漸下降，非蛋白氮含量、氨基態(tài)氮、多肽氮和TVB-N逐漸增加。后熟60天后的DPE和DPN，總氮含量較新鮮鴨蛋分別下降了7.03％和13.51％，非蛋白氮含量分別增加了90.91％和137.71％。
　　皮蛋ACE抑制肽分離:通過單因素試驗(yàn)，選擇提取時(shí)間為240min、提取溫度為50℃、提取料液比為30mL

4、·g-1和提取pH為8.0。取3kDa以下粗濾物，用Sephadex G-15分離純化，將組分b進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，為源于卵白蛋白的3個(gè)肽鏈(氨基酸序列為: LINSWVESQTNGIIRN、 SVSEEFRADHPFL和SVSEEFRADHPFLF)和源于卵轉(zhuǎn)鐵蛋白的2個(gè)肽鏈(氨基酸序列為:NKVEDIWSF和LFGPPG)。
　　皮蛋ACE抑制肽體內(nèi)試驗(yàn):灌胃原發(fā)性高血壓大鼠皮蛋ACE抑制肽6周后，卡托普利陽性對照組和低、中、高劑量

5、組血壓在給藥后各時(shí)間血壓值保持平穩(wěn)，增速緩慢，與空白組比較有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，血壓分別增加了3.70mmHg、15.66mmHg、3.33mmHg、5.60mmHg，空白組增加了19.80 mmHg。皮蛋ACE抑制肽顯著地降低總膽固醇含量，升高了高密度脂蛋白膽固醇含量，并且使得血管緊張素酶和內(nèi)皮素-1均呈現(xiàn)顯著降低（高劑量組較空白組降低了110.99和27.91 ng/mL）。SHR大鼠肝臟脂肪酸測定出:飽和脂肪酸共10