酪蛋白非磷肽的制備及其ACE抑制活性的研究.pdf

1、酪蛋白中富含多種生物活性肽，酪蛋白磷酸肽(CPPs)是酪蛋白生物活性肽中被研究和開發(fā)最早的一種，具有結(jié)合礦物質(zhì)的作用。一般在工業(yè)化生產(chǎn)CPPs過程中，有近80％的蛋白質(zhì)副產(chǎn)物--酪蛋白非磷肽(CNPPs)未被合理利用，作為飼料或廢物棄去。本論文中，在制備CPPs的同時(shí)回收其副產(chǎn)物CNPPs，并研究了大孔吸附樹脂對它的脫鹽效果及其中的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制肽，為CNPPs的開發(fā)利用提供了理論基礎(chǔ)。 論文首先研究了Alcal

2、ase水解酪蛋白生產(chǎn)CPPs和CNPPs的工藝條件，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Alcalase對酪蛋白作用的最佳條件是：底物濃度5％(w/v)，加酶量0.03mL·g-1蛋白質(zhì)，溫度60℃，pH值9.0。乙醇的濃度和酪蛋白的水解度(DH)對CPPs和CNPPs的得率以及CPPs的N/P(摩爾比)均有影響。當(dāng)乙醇濃度70％(v/v)，DH值達(dá)到18％時(shí)，CPPs釋放并沉淀完全，得率達(dá)到最高，為23.94％，N/P(摩爾比)是9.61，CNPPs得率為

3、76.06％。CPPs和CNPPs的相對分子質(zhì)量分布在200～5000之間，其中低于700的肽含量最高，分別為61.52％和67.26％。CNPPs中的疏水性氨基酸含量遠(yuǎn)高于CPPs。 由于在酪蛋白水解以及CPPs的沉淀過程中引入了大量無機(jī)鹽，導(dǎo)致CNPPs產(chǎn)品的灰份含量高達(dá)20.88％，影響了對它活性的研究，更影響了它的品質(zhì)，必須去除CNPPs中的無機(jī)鹽，所以論文研究了大孔吸附樹脂對CNPPs的脫鹽效果。使用DA201-C型大

4、孔樹脂對CNPPs脫鹽簡便可行，60mg·mL-1的CNPPs溶液上柱，用紫外檢測器檢測流出液的A220nm，以A220nm=0.05為透過點(diǎn)，水洗后用70％(v/v)乙醇解吸，流速為140mL·h-1。CNPPs經(jīng)大孔樹脂處理后，脫鹽率為95.40％，ACE抑制活性的IC50從0.35mg·mL-1降低到0.21mg·mL-1，而且多肽的回收率可以達(dá)到85％以上，同時(shí)該過程還伴隨著明顯的純化作用。經(jīng)體外消化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CNPPs經(jīng)消化道

5、酶作用后ACE抑制活性有所提高，說明在消化酶作用下，CNPPs中部分肽鍵被打斷，成為更短的肽，短肽有益于抑制ACE活性。肽譜分析顯示出CNPPs中肽的種類和組成非常復(fù)雜，這使得ACE抑制肽的分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定成為一項(xiàng)比較困難但很有意義的工作。 為了充分了解CNPPs作為降血壓功能因子的潛力，本論文利用凝膠過濾色譜和RP-HPLC從CNPPs中分離得到一種ACE抑制肽CNPPs-8-2。采用LC/ESI-MS結(jié)合氨基酸分析證明CN