酶膜反應(yīng)器水解酪蛋白連續(xù)制備ACE抑制肽的研究.pdf

1、本論文研究了以牛乳酪蛋白為原料，通過將酶解反應(yīng)與膜分離相耦合高效、經(jīng)濟、連續(xù)地水解酪蛋白制取血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制肽的技術(shù)。
　　 本文首先進行了水解用蛋白酶的篩選及酶解條件的優(yōu)化。以酶解液的ACE抑制率、蛋白質(zhì)得率為指標(biāo)，通過單酶和雙酶復(fù)合水解的相互綜合比較，確定了以中性蛋白酶作為本試驗的水解用酶，并采用正交試驗進行酶解條件的優(yōu)化，得到酶解反應(yīng)的最佳條件為：水解溫度為40℃，pH值為7.0，酶用量為2000 U/g，底

2、物濃度為8％(w/v)，酶解時間為2h。
　　 繼而本文研究了將酶解與膜分離耦合連續(xù)制備ACE抑制肽的方法。通過綜合考察超濾膜包對原料蛋白質(zhì)的截留、對酶的截留、膜通量以及膜包濾出液的ACE抑制活性，確定了以截留分子量(MWCO)5k的再生纖維素膜包作為試驗用的膜包，并通過優(yōu)化得到了超濾條件為操作壓力0.1MPa，底物濃度8％(w/v)；在此基礎(chǔ)上采用靜態(tài)間歇式反應(yīng)、半連續(xù)反應(yīng)和連續(xù)反應(yīng)3種不同的模式進行ACE抑制肽的制備，結(jié)果表

3、明靜態(tài)反應(yīng)的得率、單位時間產(chǎn)量和單位活力酶對應(yīng)的產(chǎn)量遠小于半連續(xù)和連續(xù)反應(yīng)，其中連續(xù)反應(yīng)的得率達到43.4％，單位時間產(chǎn)量為6284 mg/h，單位活力酶對應(yīng)的產(chǎn)量為0.23 mg/U，產(chǎn)物的ACE抑制率達到了81.6％(1m/mL)，整個系統(tǒng)能持續(xù)穩(wěn)定反應(yīng)8h以上；所得的ACE抑制肽產(chǎn)物經(jīng)腸道蛋白酶消化后，ACE抑制率升高，測得其IC50值為0.189 mg/mL，是同等條件下測得的卡托普利的IC50值(0.00035 mg/mL)的