珠蛋白提取、ACE抑制肽的酶法制備及酶動力學(xué)的研究.pdf

1、我國人民的肉食主要以豬肉為主，然而，大多數(shù)肉類屠宰場中豬血利用率極低，豬血球基本上被廢棄。血紅蛋白是豬血中的重要成分，含鐵量極其豐富。由血紅蛋白提取的珠蛋白是一種非常優(yōu)良的蛋白質(zhì)。由蛋白酶水解珠蛋白而獲得的多肽對血管緊張素工轉(zhuǎn)換酶(ACE)具有很高的抑制作用。 本文通過對對珠蛋白提取的試驗。確定了抗凝劑的選取為0.3％的檸檬酸三鈉；確定4倍丙酮和2％NaAc添加量為珠蛋白與血紅素提取的最優(yōu)參數(shù)；此時珠蛋白收率為29.03g(每升

2、新鮮豬血得珠蛋白的克數(shù))。 利用胃蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的單酶和雙酶水解珠蛋白，進(jìn)行珠蛋白的酶解試驗，反應(yīng)時間、加酶量、底物濃度、溫度和pH值等因素均對酶解液水解度產(chǎn)生影響。四種蛋白酶單酶及雙酶水解多肽對水解度和ACE的抑制活性有不同程度的影響，通過TCA法和RP-HLPC法對水解液進(jìn)行水解度和ACE抑制活性測定，單酶水解中以胃蛋白酶水解液的ACE抑制率最大，為94.63％；堿性蛋白酶水解液的ACE抑制率最高為

3、94.49％，水解度為14.42％。雙酶水解試驗中，胃蛋白酶與堿性蛋白酶組合的水解物的ACE抑制活性最高，達(dá)94.82％，且時間較單酶水解短，水解效率提高。在酶促反應(yīng)動力學(xué)(kinetics of enzyme-catalyzed reactions)實驗中利用 Lineweaver-Burk方法，分別以動物蛋白——珠蛋白為底物，求出Km和Vmax，以期找出酶的最優(yōu)反應(yīng)條件。 pH 2.5時，胃蛋白酶的Vmax值達(dá)到最大值，為0.190