組蛋白乙?；揎椪{控IL-4-STAT6信號轉導通路基因轉錄活性的分子機制的研究.pdf

1、研究目的：細胞因子與其受體結合后啟動復雜的細胞內分子間的相互作用，最終引起細胞基因轉錄的變化，這一過程稱為細胞的信號轉導。STAT6是信號轉導和轉錄激活因子STATs家族的一員，可被細胞因子IL-4特異性激活。IL-4與其受體結合后，循JAK/STAT6信號轉導通路，將活化信號通過蛋白質的相互作用逐級傳遞，最終激活特異性轉錄激活因子STAT6并啟動靶基因的轉錄與表達，促進靶蛋白的合成。IL-4/STAT6信號通路的過度活躍參與包括哮喘等

2、變態(tài)反應性疾病、腫瘤等多種疾病的進程。大量研究顯示STAT6-TAD可結合一系列轉錄共激活因子p100、CBP和NCoA-1等來提高STAT6介導的轉錄活性和基因表達水平。但迄今為止，STAT6轉錄調控的機制尚不明確。PSF蛋白是我們前期通過GST融合蛋白釣取結合質譜分析技術發(fā)現的在IL-4刺激后可與STAT6-TAD結合的抑制IL-4/STAT6信號轉導通路靶基因之一-Igε基因轉錄活性的轉錄抑制因子。我們前期的細胞內實驗證實了IL-

3、4刺激后PSF可將HDAC1募集到STAT6轉錄復合物中。本課題的研究目的在于初步探討組蛋白乙?；揎椪{控IL-4/STAT6信號傳導通路基因轉錄活性的分子機制。
　　 方法：本課題分兩部分進行：第一部分采用激光共聚集顯微鏡觀察法與免疫共沉淀法(Co-Immunoprecipiration)來研究PSF與STAT6特異性結合及兩者結合的功能片段。第二部分是采用染色質免疫共沉淀法(ChromatinImmunoprecipitat

4、ion Assay，ChIP)驗證PSF通過影響特異性組蛋白乙?；揎梺碚{控IL-4/STAT6信號轉導通路轉錄活性及采用甘油密度梯度離心法分離蛋白復合物，探討隨著IL-4刺激時間的延長，PSF如何參與組成STAT6轉錄活性相關的HDACs復合物。
　　 結果：①IL-4刺激后PSF與STAT6呈現細胞內共定位；PSF通過STAT6-TAD與STAT6在細胞內直接結合；IL-4誘導STAT6與PSF發(fā)生酪氨酸磷酸化是二者結合的先

5、決條件②PSF影響Igε啟動子區(qū)域組蛋白乙?；?，抑制Igε啟動子的基因表達；ChIP揭示IL-4刺激后TSA處理影響Igε啟動子區(qū)域組蛋白乙?；癄顟B(tài)從而增強Igε啟動子的基因表達；隨著IL-4刺激時點的延長，PSF作為基因轉錄抑制因子，通過募集HDAC1等蛋白因子形成HDACs復合物，動態(tài)性參與調控IL-4/STAT6介導的基因轉錄活性。
　　 結論：OIL-4誘導STAT6與PSF酪氨酸磷酸化后，PSF與STAT6-TAD結合