幾種氨基糖對(duì)受損心肌細(xì)胞和心肌組織的保護(hù)作用.pdf

1、心臟?。╤eart disease）不論從形成機(jī)理還是從危害程度上分類，其對(duì)心臟的最基本傷害均是引起不同程度的心肌細(xì)胞損傷。
　　殼聚糖是甲殼素脫乙酰后得到的高分子氨基多糖，具有良好的相容性、生物功能性、安全性和可降解性，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化工等領(lǐng)域。隨著殼聚糖改性修飾的深入和在醫(yī)藥、生物技術(shù)領(lǐng)域研究的深入，低分子量殼聚糖衍生物的功能性和安全性評(píng)價(jià)成為一個(gè)重要的研究?jī)?nèi)容。
　　硫酸軟骨素是一種糖胺聚糖，易溶于水，對(duì)維持

2、細(xì)胞環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定和正常生理功能起到重要作用。長(zhǎng)時(shí)間用藥的經(jīng)驗(yàn)顯示大分子的硫酸軟骨素作用效果比較緩慢。將硫酸軟骨素降解得小分子硫酸軟骨素，對(duì)其進(jìn)行功能性評(píng)價(jià)，比較其與大分子硫酸軟骨素的作用效果，具有重要的研究意義。
　　本課題以殼聚糖衍生物和硫酸軟骨素為基本材料，通過(guò)酶降解法，純化得到低分子量殼聚糖衍生物和低分子量硫酸軟骨素，開展了理化性質(zhì)測(cè)定，在細(xì)胞水平和動(dòng)物水平評(píng)價(jià)了殼聚糖衍生物和硫酸軟骨素對(duì)受損心肌細(xì)胞和組織的保護(hù)作用，為殼

3、聚糖衍生物和硫酸軟骨素的進(jìn)一步開發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　本實(shí)驗(yàn)取得了以下幾個(gè)方面的成果和進(jìn)展：
　　1.將羧甲基殼聚糖和硫酸軟骨素純化后分別經(jīng)殼聚糖酶和硫酸軟骨素酶降解，制備了羧甲基殼寡糖、中分子硫酸軟骨素和小分子硫酸軟骨素。
　　2.對(duì)七種氨基糖（N-乙酰氨基葡萄糖、磺酸化殼寡糖、高脫乙酰度殼寡糖、低脫乙酰度殼寡糖、羧甲基殼聚糖、羧甲基殼寡糖、硫酸軟骨素）進(jìn)行理化性質(zhì)的測(cè)定。
　　3.采用顯微觀察法和MTT法，

4、測(cè)定上述7種氨基糖對(duì)于正常H9c2心肌細(xì)胞的作用，表明7種氨基糖均無(wú)細(xì)胞毒性，且不同程度地促進(jìn)H9c2細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，N-乙酰氨基葡萄糖、磺酸化殼寡糖、低脫乙酰度殼寡糖、高脫乙酰度殼寡糖、羧甲基殼寡糖的最佳作用濃度均為50μg?mL-1，羧甲基殼聚糖的最佳作用濃度為100μg?mL-1，小分子硫酸軟骨素的最佳作用濃度為200μg?mL-1，為氨基糖的后續(xù)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用提供了理論支持。
　　4.建立體外培養(yǎng)的H9c2心肌細(xì)胞損傷模型，評(píng)

5、價(jià)7種氨基糖對(duì)受損心肌細(xì)胞的作用。通過(guò)顯微觀察法和MTT法結(jié)果顯示，7種糖對(duì)于受損心肌細(xì)胞的生長(zhǎng)有良好的促進(jìn)作用，其中小分子硫酸軟骨素和羧甲基殼寡糖促進(jìn)受損心肌細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖的效果較為突出。小分子硫酸軟骨素的最佳作用濃度為200μg?mL-1，羧甲基殼寡糖的最佳作用濃度為50μg?mL-1。
　　5.給予異丙腎上腺素復(fù)制大鼠心肌梗塞模型，在此基礎(chǔ)上評(píng)價(jià)羧甲基殼寡糖和小分子硫酸軟骨素對(duì)受損心肌的保護(hù)作用。給心肌損傷的大鼠灌胃高、中

6、、低劑量的羧甲基殼寡糖和小分子硫酸軟骨素，于連續(xù)灌胃7d和14d時(shí)取血，檢測(cè)、比較血清中心臟標(biāo)志酶（乳酸脫氫酶、肌酸激酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶）的含量，并制作組織切片進(jìn)行組織病理觀察。通過(guò)血清標(biāo)志酶的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)羧甲基殼寡糖和小分子硫酸軟骨素作用效果相近，同劑量的兩種糖進(jìn)行差異性分析，差異不顯著（P＞0.05）。在用糖劑量上，7d時(shí)中劑量組與高劑量組初步表現(xiàn)出用糖治療的優(yōu)越性（中劑量組、高劑量組與ISO損傷對(duì)照組比較，具有顯著性差異P＜0.01）；1

7、4d時(shí)，高劑量組基本恢復(fù)正常（高劑量組與正常組進(jìn)行比較，差異不顯著P＞0.05）。組織切片觀察結(jié)果與血清標(biāo)志酶表現(xiàn)結(jié)果一致。證明了兩種糖能夠促進(jìn)受損心肌的修復(fù)。
　　6.給予異丙腎上腺素法復(fù)制大鼠心肌梗塞模型，評(píng)價(jià)不同分子量硫酸軟骨素對(duì)受損心肌的保護(hù)作用。血清標(biāo)志酶含量檢測(cè)結(jié)果表明，小分子硫酸軟骨素和中分子硫酸軟骨素能明顯促進(jìn)受損心肌的修復(fù)，尤其是小分子硫酸軟骨素組作用效果最突出：將各給糖組與ISO損傷對(duì)照組進(jìn)行差異性比較，7d時(shí)