歐芹不同逆境條件下適宜內參基因的篩選.pdf

1、歐芹(Petroselinum crispum L.)，又名洋芫荽和法國香菜等，屬于傘形科歐芹屬一二年生草本植物。作為香辛蔬菜，食用嫩葉，鮮根、莖汁可供藥用。非生物脅迫，包括溫度（高溫、低溫）、鹽害和干旱等，是導致歐芹減產(chǎn)的重要因素之一。分離歐芹相關的抗性基因，篩選與抗性性狀緊密連鎖的分子標記，對于歐芹抗逆品種的選育有重要的意義。qRT-PCR是定量基因轉錄水平的主要方法之一，需要使用內參基因(Reference gene)校正目標基因

2、的表達量。
　　本實驗克隆了歐芹相關內參基因的部分片段，使用qRT-PCR技術建立每個基因相對應實時熒光定量的方法，研究了不同逆境條件下內參基因表達的穩(wěn)定性。同時，為進一步驗證在本研究中確定的內參基因，還對pcDREB1基因在歐芹高溫脅迫下的表達譜進行了研究。具體研究結果如下:
　　(1)以歐芹葉片cDNA為模板，篩選了8條內參基因(GAPDH、ACTIN、eIF-4α、SAND、UBC、TIP41、EF-1α和TUB)的中

3、間片段。與其他物種的同源基因進行BLAST比對，結果顯示堿基相似度均在80％以上。
　　(2)利用qRT-PCR技術建立了上述8條基因相對應的實時定量方法。結果表明當10倍稀釋cDNA為擴增模板時，標準曲線的敏感性和相關性較高，并且能在高通量范圍內顯示cDNA樣品的起始量，為后續(xù)實驗提供了較為準確的數(shù)據(jù)支持。
　　(3)采用不同脅迫和激素處理的定量cDNA為模板，利用qRT-PCR技術，對篩選得到的8條內參基因通過geNor

4、m、BestKeeper及NormFinder三個生物學軟件計算進行穩(wěn)定性分析。不同處理下，歐芹不同內參基因表現(xiàn)出不同的表達穩(wěn)定性。結果表明，TUB和ACTIN在高溫處理中顯示相對最為穩(wěn)定的表達水平;低溫脅迫下eIF-4α和GAPDH均可應用于穩(wěn)定性分析;干旱處理，EF-1α和ACTIN為最佳內參基因;干旱脅迫處理的最佳選擇是EF-1α和GAPDH;GA和ABA處理下均為EF-1α的表達穩(wěn)定性最佳，MeJA和SA處理條件下ACTIN和E