釀酒酵母細胞表面展示米根霉脂肪酶制備全細胞催化劑及其特性研究.pdf

1、生物柴油是一種清潔可替代綠色能源，已引起人們極大的關注。脂肪酶催化制備生物柴油，具有反應條件溫和、無污染等優(yōu)勢，是生物柴油技術的發(fā)展方向。隨著酶固定化方法的日臻完善，脂肪酶催化應用領域越來越廣泛。脂肪酶表面展示技術集分離、純化和固定化于一體，不僅可以提高脂肪酶的穩(wěn)定性，而且還能降低酶固定化操作成本。為此，我們采用a凝集素Aga2作為錨定蛋白，以釀酒酵母為宿主菌，表面展示米根霉脂肪酶(ROL)，構建全細胞催化劑，研究了全細胞催化劑的酶學特

2、性，初步探討了全細胞催化劑的發(fā)酵成本，以及在生物柴油中的應用。主要研究成果如下:
　　1.借助生物信息學方法，確定了錨定蛋白、宿主菌和目的脂肪酶蛋白表面展示單元的匹配規(guī)律，為表面展示全細胞催化劑的構建奠定了理論基礎。分析4種不同種類的脂肪酶和錨定蛋白結構信息，其中ROL為目標展示酶時，結構中具有分布較均勻的疏水性和柔性;催化三聯體由S242，D301，H354組成，陰離子氧洞為T213，L267，活性中心離C端較近。因此，選擇N端

3、錨定的a凝集素Aga2-Aga1比較合適。
　　2.以a凝集素Aga2-Aga1為錨定蛋白，成功地將ROL展示在釀酒細胞表面，獲得了具有水解橄欖油活性的全細胞催化劑。該全細胞催化劑水解橄欖油活力為78.9 U·g-1，高于相關文獻報道。同時，研究了ROL全細胞催化劑的酶學特性，最適溫度為40℃，最適pH為7.5，具有良好的穩(wěn)定性和有機溶劑耐受性。
　　3.初步探討了ROL全細胞催化劑發(fā)酵生產成本和催化生物柴油應用。結果表明，