基于納米金的多價(jià)化寡肽材料在促血管新生中的研究.pdf

1、在組織工程材料內(nèi)部構(gòu)建充分的血管網(wǎng)絡(luò)，是實(shí)現(xiàn)具有正常功能厚組織工程面臨的首要問(wèn)題。本研究利用納米金為載體，構(gòu)建多價(jià)化REDV生物活性配體，并將此多價(jià)化配體修飾到海藻酸鈉支架內(nèi)部，期望材料獲得更好的血管新生誘導(dǎo)能力。
　　本文首先制備了不同表面價(jià)態(tài)的納米金，并通過(guò)計(jì)數(shù)法、MTT法和免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)考察了納米金表面Au（I）含量對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)行為的影響。結(jié)果顯示，AuNPs表面金元素價(jià)態(tài)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞行為無(wú)顯著影響。此后，本文研究了游離態(tài)

2、及固定化納米金對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，研究結(jié)果顯示：游離態(tài)AuNPs對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)具有濃度依賴的抑制作用，相對(duì)參比材料，加入1nM游離態(tài)納米金可使細(xì)胞黏附率下降約30％，增殖7天后細(xì)胞數(shù)量下降約25%。而將AuNPs共價(jià)修飾到玻璃片表面后未顯示明顯抑制效果，其細(xì)胞黏附和增殖與參比材料無(wú)顯著性差異，相應(yīng)的黏著斑及AO/EB染色實(shí)驗(yàn)表明內(nèi)皮細(xì)胞可在固定化AuNPs材料上形成良好的黏附并在增殖過(guò)程中保持良好的活性。在上述研究基礎(chǔ)上，將內(nèi)皮細(xì)胞

3、選擇性黏附多肽REDV修飾到固定有納米金的海藻酸鈉表面上，獲得具有多價(jià)化黏附配體的海藻酸鈉材料。結(jié)果顯示，在AuNPs修飾濃度為10nM時(shí)，內(nèi)皮細(xì)胞在相應(yīng)的多價(jià)化REDV材料表現(xiàn)出較好的生長(zhǎng)行為，黏附率較參比材料高出約30%；細(xì)胞增殖5天后細(xì)胞數(shù)量比參比提高約34%。此外，多價(jià)化REDV材料比相應(yīng)的單價(jià)化材料表現(xiàn)出更好的細(xì)胞生長(zhǎng)行為，黏附率和細(xì)胞增殖5天的細(xì)胞數(shù)量分別比單價(jià)化材料提高約30%和47%；相應(yīng)的細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)顯示內(nèi)皮細(xì)胞在多價(jià)

4、化REDV材料上的鋪展面積是單價(jià)化材料的3.3倍，而且保持了更好的細(xì)胞活性。最后，通過(guò)離子交聯(lián)制備了負(fù)載多價(jià)化REDV納米金配體的海藻酸鈉水凝膠，通過(guò)調(diào)節(jié)不同配比篩選出具有較好力學(xué)性能和較低溶脹率的材料。大鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示，在材料植入14和21 d時(shí)，ALG+AuNPs-REDV材料周圍組織的新生血管密度分別為48.1/mm2和74.5/mm2，比ALG+AuNPs參比材料高出約63.6%和98.1%，而且多價(jià)化REDV凝膠材料比相應(yīng)的單