石耳子實(shí)體多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)解析及生物活性研究.pdf

1、石耳（Umbilicaria），是一種食藥兼用的真菌和藻類的共生體。其藥用價值很高，而其多糖作為一種活性物質(zhì)，具有很強(qiáng)的抗癌，抗血栓活性，能增強(qiáng)機(jī)體的免疫能力。目前國內(nèi)外對石耳多糖(UPS)的研究報道較少，對其分離純化及結(jié)構(gòu)方面的研究更是不夠全面。本文主要研究了石耳多糖的最佳提取條件，經(jīng)分離純化得到石耳多糖純品，并對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征和體外抗氧化活性進(jìn)行初探。
　　首先對石耳多糖的提取工藝進(jìn)行了研究。選取提取溫度50～90℃、提取時間

2、1～5h、提取水料比5∶1～25∶1 ml/mg和提取次數(shù)1～5次分別進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，最后選擇前三種因素利用Design-Expert軟件進(jìn)行響應(yīng)曲面分析，結(jié)合實(shí)際操作，得到石耳多糖的最佳理論提取工藝為:提取溫度為84.83℃，提取時間為3.56 h，提取水料比為20.64∶1mL/g，石耳多糖提取得率為13.37％。
　　然后將提取出的石耳粗多糖進(jìn)行分離純化后測定其基本理化性質(zhì)。利用DEAE-纖維素-52離子交換柱對石耳粗多糖進(jìn)

3、行初步分離純化，得到兩個組分UPS-1和UPS-2，得率分別為49.05％和23.23％。再利用葡聚糖凝膠G-150對UPS-1和UPS-2進(jìn)一步純化，得到兩個組分UPS-1-1和UPS-2-1，得率分別為42.17％和42.6％。
　　對石耳粗多糖UPS及分離純化后的UPS-1-1和UPS-2-1進(jìn)行基本理化性質(zhì)分析，總糖含量分別為43.68％，55.12％和53.34％;蛋白質(zhì)含量分別為1.01％，0.31％和0.28％;硫酸

4、基含量分別為2.38％，4.07％和5.02％;糖醛酸含量分別為6.50％，19.29％和19.50％。
　　對石耳多糖的兩個純化組分做結(jié)構(gòu)鑒定。利用高效體積排阻色譜法(HPSEC)檢測其相對分子量和純度，結(jié)果表明，UPS-1-1和UPS-2-1兩個組分都是單一組分，分子量分別是124.7 kD和249.4 kD。
　　對石耳多糖的兩個純化組分進(jìn)行衍生化后利用高效液相色譜法(HPLC)分析其單糖組成。UPS-1-1的單糖組成

5、及摩爾百分比為甘露糖∶鼠李糖∶葡萄糖∶半乳糖=0.59∶3.12∶93.09∶3.03;UPS-2-1的單糖組成及摩爾百分比為甘露糖∶葡萄糖=20.66∶79.34。
　　利用溴化鉀壓片法對石耳多糖的兩個純化組分進(jìn)行紅外光譜分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這兩個組分在4000 cm-1～400 cm-1范圍內(nèi)呈現(xiàn)典型的多糖吸收峰，說明檢測樣品都是多糖類物質(zhì)，其中含有硫酸和羧酸基團(tuán)。
　　運(yùn)用掃描電鏡觀察石耳多糖兩個純化組分的表面形貌，結(jié)果發(fā)

6、現(xiàn)，UPS-1-1和UPS-2-1在高倍鏡下表面平整較為光滑，說明分子間作用力強(qiáng)。利用原子力顯微鏡觀察多糖純化組分的形態(tài)，結(jié)果顯示，這兩個組分均為多個糖鏈的聚集體，而非單個糖鏈。
　　對石耳粗多糖和兩個純化組分的抗氧化活性進(jìn)行初步研究。運(yùn)用化學(xué)方法分別測量分析了石耳粗多糖(UPS)，兩個純化組分（UPS-1-1和UPS-2-1）的體外抗氧化活性。結(jié)果表明:三者還原力較弱，但它們體外能夠清除羥基自由基(·OH)和超氧陰離子自由基(O