動(dòng)物用狂犬病口服疫苗佐劑與誘餌的制備與篩選.pdf

1、野生食肉類動(dòng)物，如野狼、野狗、赤狐、浣熊等是狂犬病病毒的自然攜帶者或傳播者。防止野生食肉類動(dòng)物的狂犬病在人和家養(yǎng)動(dòng)物之間的擴(kuò)散是防制狂犬病的重要環(huán)節(jié)。與家養(yǎng)動(dòng)物注射用疫苗不同，野生食肉類動(dòng)物口服疫苗由抗原、佐劑、誘餌三個(gè)部分組成。本研究的目的是(1)用細(xì)菌脂多糖、氫氧化鋅、枸杞多糖、甘露低聚糖篩選適合口服疫苗用的免疫佐劑，并驗(yàn)證其增強(qiáng)免疫反應(yīng)的效果;(2)用牛肉粉、雞肉粉、魚肉粉、奶粉、血粉為主料制備口服疫苗用誘餌，并檢測(cè)誘餌的采食性以

2、及包埋效應(yīng)。研究方法:采用同步接毒法在BHK-21細(xì)胞上增殖狂犬病病毒SRV9弱毒疫苗株，通過半數(shù)熒光灶形成量(FFD50)試驗(yàn)對(duì)培養(yǎng)病毒滴度進(jìn)行檢測(cè)。通過正交試驗(yàn)方法對(duì)細(xì)菌脂多糖、氫氧化鋅、枸杞多糖、甘露低聚糖進(jìn)行配方篩選，用昆明小鼠做佐劑的免疫效力實(shí)驗(yàn)。篩選出的最佳復(fù)合佐劑與狂犬病病毒SRV9弱毒疫苗混勻后灌喂實(shí)驗(yàn)組小鼠，人用狂犬病疫苗腹腔3次注射、單一病毒2次口服以及單一病毒3次口服的小鼠分別作為對(duì)照組。于免疫后14天(DAI14

3、)、DAI21、 DAI28以及DAI35分別采集實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠血液，檢測(cè)血清IgG。用熒光抗體病毒中和試驗(yàn)(FAVN)對(duì)DAI35的實(shí)驗(yàn)組小鼠血清抗體進(jìn)行中和試驗(yàn)。用正交試驗(yàn)的方法優(yōu)選誘餌配方，用理化方法檢測(cè)其采食性和包埋效應(yīng)。
　　研究結(jié)果:(1)增殖、獲得的狂犬病SRV9弱毒滴度(FFD50)為10-542/0.1mL;(2)優(yōu)選的復(fù)合佐劑組方是細(xì)菌脂多糖100μg、氫氧化鋅0.8 mg、枸杞多糖50 mg以及甘露低聚糖

4、10mg。在DAI28，實(shí)驗(yàn)組小鼠的血清IgG和腸道SIgA水平均值分別為3239μg/mL和1.56 ng/mL;(3)在DAI35，復(fù)合佐劑+狂犬病病毒組誘導(dǎo)的體液免疫效果優(yōu)于單一病毒2次口服實(shí)驗(yàn)組和單一病毒3次口服實(shí)驗(yàn)組，血清抗體平均效價(jià)為0.63 IU/mL，已達(dá)到保護(hù)水平;(4)制備出五種誘餌組方，即魚肉味、血粉味、牛肉味、雞肉味、奶粉味誘餌組方;(5)在誘餌的采食試驗(yàn)中，貓、犬、狼、狐貍對(duì)魚肉味誘餌的采食率最高，其次是血粉味

5、和奶味誘餌;(6)誘餌在-80℃、-20℃可長(zhǎng)期保存，在4℃、7d條件下保存完好，即誘餌質(zhì)地適中，不變形、無著染包埋疫苗滲漏。在37℃、12h條件下，魚肉味和血粉味誘餌保持相對(duì)穩(wěn)定，即質(zhì)地適中、無包埋物滲漏，而牛肉粉、雞肉粉、奶粉型誘餌出現(xiàn)變形、滲漏。小結(jié):本文篩選出野生食肉類動(dòng)物口服疫苗所必需的復(fù)合免疫佐劑。免疫佐劑+狂犬病病毒可增加狂犬病病毒的免疫效應(yīng)。本文制備了牛肉味、雞肉味、魚肉味、血粉味和奶油味五種口服疫苗用誘餌，并確定了誘餌