動物用狂犬病口服疫苗佐劑與誘餌的制備與篩選.pdf

1、野生食肉類動物，如野狼、野狗、赤狐、浣熊等是狂犬病病毒的自然攜帶者或傳播者。防止野生食肉類動物的狂犬病在人和家養(yǎng)動物之間的擴散是防制狂犬病的重要環(huán)節(jié)。與家養(yǎng)動物注射用疫苗不同，野生食肉類動物口服疫苗由抗原、佐劑、誘餌三個部分組成。本研究的目的是(1)用細菌脂多糖、氫氧化鋅、枸杞多糖、甘露低聚糖篩選適合口服疫苗用的免疫佐劑，并驗證其增強免疫反應的效果;(2)用牛肉粉、雞肉粉、魚肉粉、奶粉、血粉為主料制備口服疫苗用誘餌，并檢測誘餌的采食性以

2、及包埋效應。研究方法:采用同步接毒法在BHK-21細胞上增殖狂犬病病毒SRV9弱毒疫苗株，通過半數熒光灶形成量(FFD50)試驗對培養(yǎng)病毒滴度進行檢測。通過正交試驗方法對細菌脂多糖、氫氧化鋅、枸杞多糖、甘露低聚糖進行配方篩選，用昆明小鼠做佐劑的免疫效力實驗。篩選出的最佳復合佐劑與狂犬病病毒SRV9弱毒疫苗混勻后灌喂實驗組小鼠，人用狂犬病疫苗腹腔3次注射、單一病毒2次口服以及單一病毒3次口服的小鼠分別作為對照組。于免疫后14天(DAI14

3、)、DAI21、 DAI28以及DAI35分別采集實驗組和對照組小鼠血液，檢測血清IgG。用熒光抗體病毒中和試驗(FAVN)對DAI35的實驗組小鼠血清抗體進行中和試驗。用正交試驗的方法優(yōu)選誘餌配方，用理化方法檢測其采食性和包埋效應。
　　研究結果:(1)增殖、獲得的狂犬病SRV9弱毒滴度(FFD50)為10-542/0.1mL;(2)優(yōu)選的復合佐劑組方是細菌脂多糖100μg、氫氧化鋅0.8 mg、枸杞多糖50 mg以及甘露低聚糖

4、10mg。在DAI28，實驗組小鼠的血清IgG和腸道SIgA水平均值分別為3239μg/mL和1.56 ng/mL;(3)在DAI35，復合佐劑+狂犬病病毒組誘導的體液免疫效果優(yōu)于單一病毒2次口服實驗組和單一病毒3次口服實驗組，血清抗體平均效價為0.63 IU/mL，已達到保護水平;(4)制備出五種誘餌組方，即魚肉味、血粉味、牛肉味、雞肉味、奶粉味誘餌組方;(5)在誘餌的采食試驗中，貓、犬、狼、狐貍對魚肉味誘餌的采食率最高，其次是血粉味

5、和奶味誘餌;(6)誘餌在-80℃、-20℃可長期保存，在4℃、7d條件下保存完好，即誘餌質地適中，不變形、無著染包埋疫苗滲漏。在37℃、12h條件下，魚肉味和血粉味誘餌保持相對穩(wěn)定，即質地適中、無包埋物滲漏，而牛肉粉、雞肉粉、奶粉型誘餌出現變形、滲漏。小結:本文篩選出野生食肉類動物口服疫苗所必需的復合免疫佐劑。免疫佐劑+狂犬病病毒可增加狂犬病病毒的免疫效應。本文制備了牛肉味、雞肉味、魚肉味、血粉味和奶油味五種口服疫苗用誘餌，并確定了誘餌