狂犬病口服基因疫苗的抗原特性研究.pdf

1、狂犬病是一個(gè)重要的全球性公共衛(wèi)生問題。我國(guó)狂犬病死亡人數(shù)高居世界第二位，位居我國(guó)重要傳染病的榜首。近年來由于養(yǎng)犬?dāng)?shù)量的增加，狂犬病成為嚴(yán)重危害我國(guó)公共衛(wèi)生安全的問題。本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了一株可以在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)RV糖蛋白的桿狀病毒，并對(duì)其作為新一代口服基因疫苗的抗原制備進(jìn)行了探索。本實(shí)驗(yàn)利用RV獸用疫苗ERA株感染BHK細(xì)胞，以RT-PCR擴(kuò)增ERA株G基因，將其克隆到pMD-18T載體上，用EcoR I/Pst I酶切T-G，純化回收目的

2、基因，亞克隆到經(jīng)改造后，含有巨瘤病毒啟動(dòng)子(CMVP)的桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pAcSG2上，構(gòu)建了表達(dá)質(zhì)粒pAc-G。經(jīng)測(cè)序鑒定，目的基因與ERA株G基因序列完全相同。使用BD BaculoGold Transfection Kit，將pAc-G與線性化的桿狀病毒DNA在Sf9細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行同源重組，得到重組桿狀病毒，經(jīng)PCR鑒定，病毒DNA內(nèi)含有ERA株G基因，用免疫熒光實(shí)驗(yàn)也檢測(cè)到了GP的表達(dá)。經(jīng)空斑純化，得到高效表達(dá)GP的重組桿狀病毒，病