狂犬病病毒減毒株CTN-181的表型與基因型特性研究.pdf

1、狂犬病是由狂犬病病毒感染所引起的，發(fā)病后死亡率幾乎100％。近年來(lái)，隨著各地養(yǎng)狗數(shù)量增多，狂犬病病例明顯增多。目前，狂犬病疫苗是唯一可有效預(yù)防狂犬病的生物制品。但對(duì)野生動(dòng)物和犬進(jìn)行大面積免疫是預(yù)防和控制人類狂犬病的根本措施，由于肌內(nèi)途徑接種的難度和局限性，WHO提倡和鼓勵(lì)發(fā)展和應(yīng)用口腔途徑對(duì)動(dòng)物特別是犬進(jìn)行大規(guī)模免疫。
　　本文利用以往疫苗一室保存的一株經(jīng)初步鑒定毒力減弱的弱毒株 CTN-181株對(duì)其進(jìn)行全面的表型和基因型特征性研

2、究，為研制獸用口服疫苗提供科學(xué)數(shù)據(jù)，結(jié)果顯示：
　　1）CTN-181株能在 BHK21細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)良好繁殖，并形成清晰可見(jiàn)的空斑，病毒滴度達(dá)107PFU/ml,適用于制備細(xì)胞培養(yǎng)活疫苗；
　　2) CTN-181株對(duì)4周齡小白鼠、家兔和豚鼠腦內(nèi)接種均無(wú)致病性，而其親本株CTN-1的感染量低于CTN-181株1000倍時(shí)仍具有致病性；
　　3）通過(guò)BHK21細(xì)胞連續(xù)傳10代，CTN-181株病毒對(duì)小鼠腦內(nèi)接種仍無(wú)致病性，

3、毒力未增強(qiáng)；經(jīng)乳鼠腦內(nèi)傳3代，各代病毒對(duì)小鼠腦內(nèi)均無(wú)致病性。
　　4）CTN-181株經(jīng)小鼠肌內(nèi)和口腔接種免疫均能產(chǎn)生高滴度的中和抗體和攻擊（腦內(nèi)和肌內(nèi)）的保護(hù)效果，口腔接種較肌內(nèi)接種免疫效果強(qiáng)，前者有效免疫劑量約為104PFU/ml，后者約為105PFU/ml；
　　5）全基因組測(cè)序結(jié)果分析CTN-181株和CTN-1株病毒均為狂犬病毒基因Ⅰ型，同源性與國(guó)內(nèi)近年來(lái)分離株最高，與國(guó)內(nèi)aG疫苗株和國(guó)外分離株和疫苗株較低；

4、>　　6）發(fā)現(xiàn)CTN-181株和CTN-1株的氨基酸差異存在于以下7個(gè)突變位點(diǎn)上，這些氨基酸的突變可能是CTN-181株減毒的分子基礎(chǔ)：
　　N157 N(AAC)→S(AGC)
　　M187 Q(CAG)→P(CCG)
　　G295 L(TTG)→V(GTG)
　　G352 R(CGA)→Q(CAA)
　　G355 N(AAT)→D(GAT)
　　G408 E(GAA)→K(AAA)
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