大海馬甾醇提取物對小鼠生殖系統(tǒng)的影響及機理研究.pdf

1、目的:探討海馬甾醇提取物對小鼠生殖系統(tǒng)的影響及機制，為合理有效的利用海馬等中藥材提供理論依據(jù)。s
　　方法:1、首先選取動物甾醇對照品膽甾醇為標準，繪制標準曲線。然后按提取溫度、提取時間、料液比三個單因素試驗方案，用索氏抽提儀提取海馬甾醇。皂化后，按香草醛-高氯酸顯色法測定該樣品吸光度。根據(jù)膽甾醇的標準曲線，計算出6個梯度樣品中的總甾醇提取量，選出每個因素的最優(yōu)提取條件。最后根據(jù)響應面設計，推算出最優(yōu)化的提取條件，并以實驗印證。<

2、br>　　2、用高效液相色譜儀，以乙腈、水、異丙醇為洗脫劑，分離所提取的海馬甾醇成分。
　　3、取72只ICR級健康雄性小鼠，平均分為4組，分別為對照組（0.9％生理鹽水）、低劑量組(1 mg/ml)、中劑量組(3 mg/ml)、高劑量組(5 mg/ml)。每組內(nèi)的18只再隨機分為3小組，分別灌喂10d、20 d、30d后處死。(1)分析各組小鼠臟器系數(shù)的變化(2)用CASA精子系統(tǒng)分析精子質(zhì)量(3)測定小鼠體內(nèi)的睪酮T、促黃體生

3、成素LH、促卵泡激素FSH、高密度脂蛋白膽固醇HDL-c、低密度脂蛋白膽固醇LDL-c、乳酸脫氫酶LDH、堿性磷酸酶AKP、酸性磷酸酶ACP的活性(4)利用顯微鏡觀察小鼠睪丸和腎臟組織的結構變化(5)運用熒光定量PCR技術，檢測小鼠睪丸內(nèi)StAR、P450scc、P45017以及P450arom的表達量變化。
　　結果:1、通過響應面分析，得到數(shù)據(jù)模型:海馬總甾醇提取量(mg/g)=4.85+0.38×A+0.74×B+0.62×

4、C+0.32×A×B+0.17×A×C+0.40×B×C-0.78×A2-0.63×B2-0.10×C2(R2=0.9722)，其中A為提取溫度/℃，B為提取時間/h，C為料液比/ml·g-1。確定了最有提取方法為:提取溫度:79℃，提取時間:7.7h，料液比:80 ml/g，甾醇提取量:5.01 mg/g。2、通過高效液相色譜分析，確定其甾醇物質(zhì)的分離條件。流動相選為23％乙腈，70％水和7％異丙醇。3、海馬甾醇提取物對小鼠的體重、臟

5、器系數(shù)無顯著性影響。4、海馬甾醇在一定程度上可顯著增加小鼠精子濃度，高濃度的甾醇在灌喂初期對精子的促進作用相對較弱。5、通過酶活力檢測發(fā)現(xiàn)海馬甾醇提取物能夠影響小鼠體內(nèi)的激素水平，對T、LH、HDL-c等有促進作用;對FSH、、LDL-c、LDH的影響作用不明顯;對ACP、AKP的影響機制較復雜，需進一步研究。6、通過睪丸和腎臟的HE染色切片觀察，發(fā)現(xiàn)海馬甾醇提取物可改變小鼠睪丸曲細精管結構，增加精原細胞層數(shù)，增加各級精細胞、睪丸間質(zhì)細

6、胞和成熟精子的數(shù)目，促進精子的形成。但長期高劑量的攝取海馬甾醇提取物后，對小鼠睪丸和腎臟的結構有一定的改變，可能存在慢性毒性作用。7、通過熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)，中低劑量的海馬甾醇提取物能夠增加StAR、P450scc和P450c17的基因表達，抑制P450arom的合成，增加小鼠體內(nèi)睪酮激素含量，進一步增加小鼠精子的合成和分泌。
　　結論:1、海馬甾醇對小鼠無急性毒性作用，對精子濃度促進作用明顯。2、長期高濃度的海馬甾醇攝入對機體有