光譜法測(cè)定轉(zhuǎn)基因牛序列特異性核酸片段的研究.pdf

1、隨著轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品(GMO)商品化發(fā)展進(jìn)程的推進(jìn)，涉及GMO的安全評(píng)價(jià)和安全管理引起了人們的高度關(guān)注。在安全評(píng)價(jià)中，首要任務(wù)就是對(duì)轉(zhuǎn)基因樣品進(jìn)行檢測(cè)。確定待測(cè)樣品中是否含有轉(zhuǎn)基因成分，主要通過(guò)檢測(cè)插入的外源DNA和基于轉(zhuǎn)基因生物中特定基因表達(dá)產(chǎn)物（新型蛋白質(zhì)），其中基于DNA水平的檢測(cè)方法因其具有快速準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)而受到廣泛的應(yīng)用。但是，對(duì)于長(zhǎng)鏈DNA片段的特異性檢測(cè)仍然存在挑戰(zhàn)?；跓晒饽芰抗舱褶D(zhuǎn)移(FRET)的熒光探針因具有高特異性而獲得研

2、究者的較多關(guān)注。近年來(lái)，具有獨(dú)特物理和化學(xué)性質(zhì)的金納米粒子(AuNPs)也經(jīng)常被用于構(gòu)建新穎的化學(xué)和生化傳感器。本文以探針雜交為基礎(chǔ)，結(jié)合熒光技術(shù)和納米分析技術(shù)，構(gòu)建了熒光染料探針和納米金光學(xué)分子探針，并以此建立了三種用于檢測(cè)轉(zhuǎn)基因牛序列特異性長(zhǎng)鏈核酸片段的新方法。本論文的主要內(nèi)容及研究結(jié)果如下:
　　1.利用長(zhǎng)鏈oligos制備了FITC-MB和TR-MB兩種熒光探針，基于與目標(biāo)物雜交導(dǎo)致兩次FRET的過(guò)程，構(gòu)建了一種簡(jiǎn)便快速、

3、特異性好、準(zhǔn)確度高的檢測(cè)轉(zhuǎn)基因牛序列特異性長(zhǎng)鏈核酸片段的方法。
　　2.利用發(fā)夾結(jié)構(gòu)的巰基長(zhǎng)鏈DNA功能化修飾納米金，制備了特異性識(shí)別目標(biāo)物的納米金比色探針，以捕獲探針、顯色探針和目標(biāo)物的三組分“三明治雜交”為基礎(chǔ)構(gòu)建了比色傳感器，實(shí)現(xiàn)了對(duì)轉(zhuǎn)基因牛PCR產(chǎn)物的可視化檢測(cè)。
　　3.利用發(fā)夾結(jié)構(gòu)的巰基長(zhǎng)鏈DNA功能化修飾納米金，制備了特異性識(shí)別目標(biāo)物的納米金光學(xué)探針，采用共振光散射技術(shù)，根據(jù)納米金探針在目標(biāo)物存在時(shí)聚集程度的變