微藻和蒜頭果來(lái)源3-酮脂酰-CoA合酶基因克隆及耶魯維亞酵母(Yarrowia lipolytica)產(chǎn)神經(jīng)酸的初步研究.pdf

1、神經(jīng)酸(C24:1)是超長(zhǎng)鏈單不飽和脂肪酸(very long chain monunsatuated fattyacid, VLCMFA)中常見(jiàn)且具有獨(dú)特的工業(yè)用途和潛在藥用保健功效的脂肪酸，現(xiàn)在的主要來(lái)源是動(dòng)物，近年來(lái)，生物工程改造對(duì)于植物油的開(kāi)發(fā)利用得到了發(fā)展，卻仍存在著來(lái)源少、規(guī)模化生產(chǎn)較難等制約。本文是針對(duì)產(chǎn)油酵母耶魯維亞酵母(Yarrowia lipolytica)的產(chǎn)神經(jīng)酸(nervonic acid)進(jìn)行基因改造和培養(yǎng)優(yōu)

2、化。對(duì)外源基因微藻來(lái)源的3-酮脂酰-CoA合酶(3-ketoacyl-CoA synthase，KCS)、擬南芥來(lái)源的FAE1基因、酵母來(lái)源的DGA1基因和ELO2基因，利用Gibson Assembly方法，高效的進(jìn)行了多基因表達(dá)質(zhì)粒pMT-ZKCS、pMT-ZKCS-ELO2、pMT-DGA1-FAE1等的構(gòu)建工作，并將酵母轉(zhuǎn)化方法進(jìn)行改進(jìn)后進(jìn)行成功轉(zhuǎn)化。并通過(guò)對(duì)于篩選標(biāo)記的選擇和啟動(dòng)子的優(yōu)化等方面，獲得了有一定價(jià)值的突變株:在耶魯

3、維亞酵母的油脂占干酵母比重上從12％提高到了35％;調(diào)整了耶魯維亞酵母的脂肪酸組成，使得超長(zhǎng)鏈脂肪酸C24:0的含量得到提高。建立了一套完整有效的耶魯維亞酵母的分子生物學(xué)研究機(jī)制，為后面的研究打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。更為之后進(jìn)行耶魯維亞酵母產(chǎn)神經(jīng)酸的產(chǎn)業(yè)化做了理論探索。
　　另外通過(guò)對(duì)于蒜頭果的研究和分析，利用高效touch-down PCR、短引物PCR和TAIL-PCR等特殊的分子技術(shù)，快速準(zhǔn)確的克隆得到高神經(jīng)酸含量的蒜頭果的3-酮