影響益生菌活性因素的研究.pdf

1、益生菌的活性是衡量含有益生菌的相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量及貨架期的一個(gè)重要標(biāo)準(zhǔn)。如何提高益生菌的活性以獲得高活性的益生菌，一直以來都是困擾著益生菌產(chǎn)品生產(chǎn)者和科技工作者的瓶頸。本課題所選用的益生菌菌種為保加利亞乳桿菌（Lactobacillusbulgaricus，LB),為了獲得高活性的益生菌，從益生菌菌體培養(yǎng)開始著手，通過培養(yǎng)基中所用的碳源、氮源和菌體生長(zhǎng)促進(jìn)因子的選擇、耐熱試驗(yàn)以及產(chǎn)品保藏條件等研究來為高活性益生菌產(chǎn)品的實(shí)現(xiàn)提供一定的理論依據(jù)

2、和技術(shù)支持。
　　 首先，篩選出對(duì)LB菌體生長(zhǎng)有很好促進(jìn)作用的碳源、氮源和蔬菜浸提液，再組合培養(yǎng)基培養(yǎng)LB菌體并進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。其次，選擇出對(duì)LB菌體生長(zhǎng)促進(jìn)作用效果最顯著的蔬菜浸提液進(jìn)行成分分離、提取，再分別組合培養(yǎng)基培養(yǎng)LB菌體，選出效果最佳的蔬菜成分通過高效液相色譜(HPLC)進(jìn)行鑒定。再次，將在各組添加了對(duì)LB菌體生長(zhǎng)促進(jìn)作用較好的蔬菜浸提液的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的LB菌體分離出來，經(jīng)過懸浮、造粒等處理后分別置于45℃、55℃

3、、65℃、80℃條件下進(jìn)行熱處理，選出具有較好耐熱能力的LB菌體。最后，將上述實(shí)驗(yàn)中耐熱能力最好的LB菌體與脫脂乳粉混合、造粒、壓片和封裝，分別置于常溫和4℃條件下儲(chǔ)藏并測(cè)定LB菌體活菌數(shù)的變化。其結(jié)果有:
　　 (1)對(duì)LB菌體生長(zhǎng)的促進(jìn)效果最佳的碳和氮源分別為玉米淀粉和蛋白胨。當(dāng)培養(yǎng)到24h時(shí)，在添加有玉米淀粉、蛋白胨的培養(yǎng)液中的LB菌體濃度分別達(dá)到7.5×108cfu/ml、2.4×108cfu/ml。48種蔬菜浸提液中有

4、9種對(duì)LB菌體的生長(zhǎng)有較好的促進(jìn)作用，它們分別為小白菜、蓮花白、油麥菜、山藥、白蘿卜、胡蘿卜、小青菜、芹菜、黃瓜。當(dāng)培養(yǎng)到24h時(shí)，各組培養(yǎng)液中的LB菌體的濃度分別達(dá)到9.0×108cfu/ml、9.1×108cfu/ml、8.0×108cfu/ml、1.2×109cfu/ml、1.0×109cfu/ml、1.4×109cfu/ml、8.1×108cfu/ml、7.1×108cfu/ml和2.8×109cfu/ml，其中添加有黃瓜浸提液

5、的培養(yǎng)基中的LB活菌數(shù)的濃度最大。擴(kuò)大培養(yǎng)過程中各組培養(yǎng)基中的LB菌體均能長(zhǎng)時(shí)間保持較高的活性。
　　 (2)黃瓜所含的各組成分中脂溶性成分對(duì)LB菌體的生長(zhǎng)起著較好的促進(jìn)作用，其中，類胡蘿卜素作用最為突出。當(dāng)LB接種到添加有類胡蘿卜素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)到24h時(shí)，培養(yǎng)基中的LB菌體濃度達(dá)到1.6×108cfu/ml。當(dāng)用高效液相色譜對(duì)類胡蘿卜素的組成進(jìn)行鑒定時(shí)，確定了其中含有β-類胡蘿卜素。
　　 (3)將添加有小白菜、蓮花

6、白等9種蔬菜浸提液的培養(yǎng)基中培養(yǎng)出的LB菌體分離后與分別脫脂乳粉混合、造粒、封裝，置于高溫條件下進(jìn)行處理。結(jié)果顯示，添加有白蘿卜浸提液的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的LB菌體表現(xiàn)出最好的耐熱能力;置于45℃、55℃、65℃和80℃條件下處理2h，乳粉顆粒中的LB菌體的活菌數(shù)分別為6.7×109cfu/g、2.3×109cfu/g、1.1×108cfu/g、5.7×106cfu/g。
　　 (4)將于添加白蘿卜浸提液的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的LB菌體分離出

7、來，經(jīng)過與脫脂乳粉混合造粒、壓片、封裝并分別置于常溫和4℃條件下保藏。結(jié)果顯示，不管是乳粉顆粒還是奶片最佳的保藏條件都是4℃冷藏。乳粉顆粒中的LB菌體在常溫下放置到120d時(shí)活菌數(shù)則低于106cfu/g，而4℃冷藏的乳粉顆粒中的LB活菌數(shù)在放置到180天時(shí)活菌數(shù)為3.5×106cfu/g。奶片中的LB菌體在常溫下放置到150d時(shí)活菌數(shù)則低于106cfu/g;而4℃條件下保藏的奶片中的LB菌體在放置到180d時(shí)，活菌數(shù)則依然高達(dá)5.8×1