鷹嘴豆肽生物活性及構(gòu)效關(guān)系解析.pdf

1、人類攝食的蛋白質(zhì)經(jīng)過消化道消化后，主要以低聚肽的形式被吸收，某些具有生物活性的低聚肽以非活性狀態(tài)存在于蛋白質(zhì)的長(zhǎng)鏈中，當(dāng)用適當(dāng)?shù)牡鞍酌杆鈺r(shí)，其活性被釋放出來(lái)，不僅易于消化吸收，而且還具有多種調(diào)節(jié)人體代謝及生理功能的作用，是開發(fā)功能性食品和篩選藥物的天然資源寶庫(kù)。在我國(guó)，鷹嘴豆是一種天然植物蛋白資源，所含營(yíng)養(yǎng)豐富，并具有多種生理功能，還是一味維族民間藥和傳統(tǒng)中藥，且鷹嘴豆肽也已經(jīng)成為了植物源活性肽的研究熱點(diǎn)之一。
　　本文選擇堿性

2、蛋白酶(Alcalase)和復(fù)合風(fēng)味酶(Flavourzyme)分步水解來(lái)制備鷹嘴豆肽(CPe)。通過葡聚糖凝膠SephadexG-25層析進(jìn)行分離純化，得到Fra-I、II、III共三個(gè)級(jí)分。
　　在鷹嘴豆肽體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)中通過CPe灌胃，以環(huán)磷酰胺為對(duì)照，觀察CPe對(duì)小鼠狀態(tài)的影響，測(cè)定體重、腫瘤大小、抑瘤率、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)、巨噬細(xì)胞吞噬能力、脾細(xì)胞吞噬能力等免疫指標(biāo)，以及MDA、SOD和NO等抗氧化指標(biāo)。表明不同濃度的鷹嘴豆

3、肽對(duì)H22荷瘤小鼠的腫瘤生長(zhǎng)都有一定的抑制作用，可以提高荷瘤小鼠免疫器官的重量，增強(qiáng)荷瘤小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力、脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力、DNFB誘導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)，提示CPe對(duì)荷瘤小鼠的特異性和非特異性免疫功能具有明顯增強(qiáng)作用，而且CPe能顯著提高荷瘤小鼠體內(nèi)抗氧化酶SOD的活性，減少脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA的含量，揭示CPe可提高機(jī)體抗氧化能力而發(fā)揮抗腫瘤作用。
　　采用液質(zhì)聯(lián)用、傅里葉-拉曼光譜、傅里葉-紅外光譜、分子模擬等技術(shù)對(duì)CP

4、e-III構(gòu)象進(jìn)行了深入研究與分析。通過液質(zhì)聯(lián)用一級(jí)質(zhì)譜得到CPe-III的相對(duì)分子質(zhì)量為1155Da，利用BioWorks3.3并結(jié)合二級(jí)質(zhì)譜結(jié)果分析推測(cè)出其氨基酸序列為RQSHFANAQP。傅里葉-拉曼光譜和紅外光譜所得結(jié)果對(duì)質(zhì)譜結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，并進(jìn)一步得出CPe-III的二級(jí)結(jié)構(gòu)可能含有α-螺旋(66％)和卷曲結(jié)構(gòu)(21%)。通過分子動(dòng)力學(xué)模擬技術(shù)對(duì)CPe-III的空間結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)和模擬，并對(duì)CPe-III的構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行了解析與探討