牛乳酪蛋白活性肽構效關系研究及定向酶解初探.pdf

1、本論文主要研究了酪蛋白來源的ACE抑制肽和酪蛋白磷酸肽的構效關系及初步探索了構效關系指導下酪蛋白的定向酶解。為了研究磷酸肽分子結構和持鈣功能之間的關系，首先在酪蛋白磷酸肽核心結構的基礎上設計合成了6條不同結構的磷酸肽，測定了其阻止磷酸鈣沉淀的能力，模擬腸道環(huán)境下磷酸肽所持鈣透過半透膜的能力以及磷酸肽的表觀結合常數(shù)，并將合成的磷酸肽與純化的商品磷酸肽進行了比較。結果表明，磷酸基的數(shù)量和位置均是磷酸肽的持鈣能力的重要影響因素，在所有的合成磷

2、酸肽中，含兩個不連續(xù)的磷酸絲氨酰基的磷酸肽持鈣效果最好且透過半透膜的能力最強。
　　 繼而用藥效團模型研究了ACE抑制肽的構效關系，首先搜集了文獻報道的28條ACE抑制肽及其活性作為訓練集生成藥效團模型，得到的最優(yōu)模型含有五個特征：一個陰離子中心(N)，兩個氫鍵受體(A1 and A2)，兩個疏水中心(H1 andH2)，接著用該模型在肽庫預測和篩選得到三條新的具有較高ACE抑制活性的肽序列并委托合成該肽。對合成肽進行了活性檢測

3、，結果表明活性肽的半抑制濃度排序和預測結果一致。
　　 最后選擇39種蛋白酶，用酶切軟件peptidecutter對已知序列的酪蛋白進行模擬酶切，根據(jù)生成的寡肽數(shù)量篩選最適水解用酶并進行了酶解驗證，確定了胰蛋白酶為最適用酶，在40℃，pH為7.5的酶解條件下，酪蛋白轉化利用率達到90.32％。再通過超濾分離酶解液得到了分子量小于1k部分，其ACE抑制率從分離前的15.19％提高到了92.31％(測定濃度均為2.36 mg/ml)