異噁唑酰胺類衍生物的合成、免疫抑制活性及構(gòu)效關(guān)系研究.pdf

1、免疫抑制劑可抑制機(jī)體的異常免疫反應(yīng)，它在治療自身免疫性疾病和器官移植抗排斥反應(yīng)方面具有重要作用。近年來(lái)，越來(lái)越多的新型免疫抑制劑被研發(fā)應(yīng)用于臨床中，雖然新型免疫抑制劑的研發(fā)取得了巨大的進(jìn)展，但同時(shí)也存在著挑戰(zhàn)，低毒高效、價(jià)格低廉的新型免疫抑制劑仍是研發(fā)的熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)與淋巴細(xì)胞有關(guān)的信號(hào)因子在mTOR信號(hào)通路的傳導(dǎo)中發(fā)揮重要作用，如白細(xì)胞介素IL-2、IL-4等胞外細(xì)胞因子經(jīng)mTOR信號(hào)通路的傳遞，可促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖，作用于mTOR靶

2、點(diǎn)的免疫抑制劑通過(guò)阻斷信號(hào)的傳導(dǎo)而抑制淋巴細(xì)胞的增殖，從而在免疫治療中發(fā)揮作用?；谟?jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)（CADD）在研究以mTOR為靶點(diǎn)的新型免疫抑制劑時(shí)具有研發(fā)時(shí)間短、成本較低等優(yōu)點(diǎn)，這使得以CADD為基礎(chǔ)的新型免疫抑制劑藥物分子的研發(fā)具有光明的前景。
　　課題在實(shí)驗(yàn)室前期工作中以mTOR為靶點(diǎn)篩選出先導(dǎo)化合物的基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)先導(dǎo)化合物進(jìn)行位點(diǎn)改造，設(shè)計(jì)新型結(jié)構(gòu)的異噁唑酰胺類化合物，運(yùn)用逆向分析全合成的方法，合成出8個(gè)異噁唑酰胺

3、類化合物，體外生物活性實(shí)驗(yàn)測(cè)定了化合物的免疫抑制活性。運(yùn)用實(shí)驗(yàn)室前期合成的17個(gè)化合物與本課題合成的8個(gè)化合物，共25個(gè)化合物建立三維定量構(gòu)效關(guān)系模型，系統(tǒng)性分析化合物結(jié)構(gòu)與活性的關(guān)系，并在三維等勢(shì)圖的基礎(chǔ)上確定化合物的優(yōu)勢(shì)改造位點(diǎn)。通過(guò)分子對(duì)接從分子水平層面分析活性最好的化合物與mTOR受體蛋白的相互作用模式，基于這些實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果，以期為高選擇性高活性、具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新型免疫抑制劑的研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)思路和理論依據(jù)。
　　課題主要

4、內(nèi)容：
　　1).異噁唑酰胺類衍生物的設(shè)計(jì)
　　基于分子對(duì)接方法模擬先導(dǎo)化合物在雷帕霉素靶蛋白（mTOR）受體中的作用模式，分析化合物與受體蛋白的結(jié)合模式，在先導(dǎo)化合物的基礎(chǔ)上改造設(shè)計(jì)新型結(jié)構(gòu)的異噁唑酰胺類衍生物。
　　2).異噁唑酰胺類衍生物的合成、純化及結(jié)構(gòu)確定
　　異噁唑酰胺類衍生物的合成采用逆向全合成的方法，參考文獻(xiàn)中的方法通過(guò)五步合成路線合成8個(gè)異噁唑酰胺類衍生物，純化合成的化合物，通過(guò)液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)

5、用（LC-MS）技術(shù)及核磁共振氫譜/碳譜（1H NMR/13C NMR）等圖譜鑒定化合物結(jié)構(gòu)。
　　3).化合物體外活性測(cè)定，擬合出半數(shù)抑制濃度
　　采用CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)技術(shù)，測(cè)定所合成的8個(gè)化合物及課題所在實(shí)驗(yàn)室前期合成的17個(gè)化合物（共25個(gè)化合物），對(duì)急性T細(xì)胞白血病系Jurkat細(xì)胞和BALB/c小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的免疫抑制活性，通過(guò) SPSS.19軟件工具擬合出半數(shù)抑制濃度（IC50）。
　　4).定量構(gòu)

6、效關(guān)系及分子對(duì)接研究
　　基于所建的3D-QSAR（三維定量構(gòu)效關(guān)系）模型分析25個(gè)化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)與生物活性的相互關(guān)系，通過(guò)三維等勢(shì)圖確立化合物的優(yōu)勢(shì)改造位點(diǎn)。通過(guò)分子對(duì)接方法分析小分子配體和受體蛋白氨基酸殘基之間的相互作用，研究化合物與受體蛋白的結(jié)合模式。以此，在3D-QSAR和分子對(duì)接的基礎(chǔ)上指導(dǎo)新化合物的結(jié)構(gòu)改造，為設(shè)計(jì)出更優(yōu)的這類酰胺化合物提供科學(xué)根據(jù)。
　　研究成果：
　　1).通過(guò)分子對(duì)接分析先導(dǎo)化合物與受

7、體蛋白的相互作用，改造出8個(gè)全新結(jié)構(gòu)的異噁唑酰胺類化合物，運(yùn)用逆向合成的方法合成出化合物，通過(guò)圖譜確定了合成的化合物結(jié)構(gòu)與目標(biāo)化合物一致，純度達(dá)到98％以上。
　　2).測(cè)定出25個(gè)異噁唑酰胺類衍生物對(duì)急性T細(xì)胞白血病系Jurkat細(xì)胞的免疫抑制作用，得出半數(shù)抑制濃度，測(cè)定出活性最好的15號(hào)化合物對(duì)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的增殖抑制作用和半數(shù)抑制濃度。
　　3).成功構(gòu)建3D-QSAR模型，分析了化合物結(jié)構(gòu)與活性的關(guān)系，通過(guò)三維等勢(shì)