新型DNA電化學(xué)生物傳感器的構(gòu)建及其在生物分析中的應(yīng)用.pdf

1、隨著近年來(lái)傳感器技術(shù)的迅速發(fā)展，DNA生物傳感器因具有電極制作簡(jiǎn)便、使用壽命長(zhǎng)、重現(xiàn)性好、靈敏度高、成本低、易于實(shí)現(xiàn)微型化等優(yōu)點(diǎn)，在臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、遺傳工程、藥物作用機(jī)理、新藥篩選、環(huán)境監(jiān)測(cè)和食品工程等領(lǐng)域已得到廣泛地研究與應(yīng)用.
　　本文構(gòu)建了兩種新型DNA電化學(xué)生物傳感器分別對(duì)特定序列的DNA及其損傷情況和地高辛抗體進(jìn)行檢測(cè)。
　　DNA作為儲(chǔ)存和傳遞遺傳信息的生物大分子，其完整性對(duì)生物體來(lái)說(shuō)具有至關(guān)重要的作用。本文利用外

2、切酶Ⅲ對(duì)雙鏈的水解作用和二茂鐵良好的傳遞電子的能力，設(shè)計(jì)了一種方便，快捷并且靈敏度很高的DNA電化學(xué)生物傳感器來(lái)檢測(cè)特定序列的DNA及其損傷情況。首先將二茂鐵標(biāo)記的探針DNA與捕獲探針DNA1的一段在雜交液中雜交形成雙鏈。當(dāng)目標(biāo)DNA出現(xiàn)之后，與捕獲探針DNA1的另一段形成雙鏈。由于雙鏈中目標(biāo)DNA和探針DNA的3'端都突出，捕獲探針的3'端為平末端，因外切酶Ⅲ作用于雙鏈的3'平和凹末端，所以捕獲探針DNA1被水解掉。二茂鐵修飾的探針D

3、NA和目標(biāo)DNA從雙鏈中釋放，使目標(biāo)DNA得以循環(huán)。被修飾在電極上的捕獲探針DNA2將釋放出來(lái)的探針DNA捕獲雜交，在電極表面形成雙鏈，二茂鐵分子被拉近到電極表面產(chǎn)生很強(qiáng)的電化學(xué)信號(hào)。通過(guò)電化學(xué)信號(hào)的不同間接的檢測(cè)目標(biāo)DNA及其損傷。外切酶Ⅲ促進(jìn)了目標(biāo)DNA的循環(huán)，提高了檢測(cè)限。這種方法具有很高的靈敏度和特異性。
　　特異性抗體檢測(cè)是協(xié)助臨床診斷，在某些疾病中亦是觀察療效及預(yù)后的一個(gè)指標(biāo)。因此特異性抗體的檢測(cè)具有特殊的、重要的意義

4、。本文以二茂鐵分子作為電化學(xué)標(biāo)記物，利用銀離子的作用在電極表面形成DNA的三鏈構(gòu)建了一種新型的靈敏檢測(cè)地高辛抗體的DNA電化學(xué)生物傳感器。該方法以金電極作為基體電極，將二茂鐵標(biāo)記的發(fā)夾狀寡核苷酸鏈通過(guò)金硫鍵共價(jià)結(jié)合的方式修飾在金電極表面。發(fā)卡結(jié)構(gòu)將二茂鐵分子拉近到電極表面產(chǎn)生電化學(xué)信號(hào)。在銀離子的作用下，將地高辛抗原標(biāo)記的寡核苷酸鏈與二茂鐵標(biāo)記的發(fā)卡狀寡核苷酸鏈的環(huán)狀部分結(jié)合形成三連，發(fā)卡結(jié)構(gòu)被打開(kāi)，二茂鐵分子遠(yuǎn)離電極，使得產(chǎn)生的電流信