體外預(yù)測已烯雌酚引起藥物-藥物相互作用的可能性.pdf

1、目的:體外實(shí)驗(yàn)考查己烯雌酚對五種主要細(xì)胞色素P450酶亞型活性的抑制作用，以評估己烯雌酚(DES)通過抑制這五種細(xì)胞色素P450(P450，CYP)亞型而引發(fā)藥物藥物相互作用的可能性。
　　 方法：混合人肝微粒體與不同濃度的DES（或陽性抑制劑）、五種主要細(xì)胞色素P450酶的探針底物在37℃條件下孵育相應(yīng)的反應(yīng)時(shí)間后，用高效液相色譜-紫外吸收（HPLC-UV）法觀察探針底物的代謝產(chǎn)物的生成率，計(jì)算IC50值。進(jìn)一步，選取不同的探

2、針底物濃度（覆蓋Km值）和DES濃度（覆蓋IC50值）測定出相應(yīng)的代謝速率，用Lineweaver-Burk作圖和Dixon作圖來判斷可逆抑制類型，再用二次作圖（Lineweaver-Burk作圖中各線的斜率對DES濃度作圖）來計(jì)算抑制動(dòng)力學(xué)參數(shù)Ki。單點(diǎn)失活法用于測定DES對五種主要細(xì)胞色素P450酶是否有基于機(jī)理的抑制。結(jié)合Ki值和DES的最大血藥濃度(Cmax)對體內(nèi)產(chǎn)生的藥物-藥物相互作用進(jìn)行預(yù)測。
　　 結(jié)果：己烯雌酚

3、對CYP3A4，CYP2C8，CYP2C9和CYP2E1體現(xiàn)出濃度依賴型的抑制，相應(yīng)的IC50值分別為6μmol·L-1，4.9μmol·L-1，3.6μmol·L-1和30μmol·L-1。DES對CYP3A4，CYP2C8，CYP2C9和CYP2E1抑制的Dixon作圖的交點(diǎn)都在第二象限，而Linewever-Burk作圖的交點(diǎn)都在縱軸上，這兩方面證據(jù)共同證實(shí)DES對CYP3A4，CYP2C8，CYP2C9和CYP2E1抑制屬于競爭

4、型抑制。二次作圖計(jì)算出相應(yīng)的Ki值為4.4μmol·L-1(CYP3A4)和8.0μmol·L-1(CYP2C8)3.0μmol·L-1(CYP2C9)和5.0μmol·L-1(CYP2E1)。DES對CYP3A4,CYP2C8,CYP2C9,CYP1A2和CYP2E1不存在基于機(jī)理的抑制。利用DES的最大血藥濃度（Cmax=18.7μmol·L-1）計(jì)算出AUC的增加值分別為4.3（CYP3A4代謝的底物）和2.3（CYP2C8代謝的