產(chǎn)共軛亞油酸菌株的篩選鑒定及其發(fā)酵工藝參數(shù)優(yōu)化研究.pdf

1、采用紫外分光光度法結(jié)合氣相色譜法對分離自四川酸泡菜、嬰兒糞便和發(fā)酵玉米秸稈的菌株進(jìn)行了產(chǎn)CLA的篩選，以期獲得具有轉(zhuǎn)化LA生成cis9，trans11CLA和trans10，cis12CLA兩種有生理活性異構(gòu)體的高產(chǎn)菌株。并運(yùn)用形態(tài)學(xué)特征、生理生化特征分析等細(xì)菌學(xué)鑒定的經(jīng)典方法以及16SrDNA序列分析，對所篩選出CLA產(chǎn)量較高，而且來源不同的菌株進(jìn)行了鑒定，確定了菌株的分類地位。進(jìn)一步確定了菌株的最優(yōu)發(fā)酵底物，優(yōu)化了菌株的生長條件和發(fā)

2、酵工藝參數(shù)。得到以下結(jié)果:
　　 (1)用紫外分光光度法，從來自四川酸泡菜、嬰兒糞便和發(fā)酵玉米秸稈的已經(jīng)純化的150株菌中，篩選到具有發(fā)酵轉(zhuǎn)化LA為CLA的菌株37株。其中，25株菌在233nm處有特征吸收峰，3株菌在232nm處有特征吸收峰，9株菌在234nm處有特征吸收峰。
　　 （2)運(yùn)用氣相色譜法對篩選到的37株菌產(chǎn)的CLA是否為具有生理活性的c-9，t-11CLA和t-10，c-12CLA進(jìn)行確定。結(jié)果顯示:3

3、7株菌均具有產(chǎn)c-9，t-11CLA和t-10，c-12CLA的能力，且產(chǎn)c-9，t-11CLA的能力高于產(chǎn)t-10，c-12CLA的能力。37株菌中產(chǎn)量最高的是菌株P(guān)C-21，c-9，t-11CLA和t-10，c-12CLA產(chǎn)量分別為317.219μg/L和250.734μg/L，CLA總產(chǎn)量為567.952μg/L。
　　 （3)挑選5株產(chǎn)c-9，t-11CLA和t-10，c-12CLA能力較高的菌株（YE1、YE6、PC-

4、21、PC-24和LA62）進(jìn)行鑒定，發(fā)現(xiàn)5株菌在MRS培養(yǎng)基上的菌落較小，菌落直徑為1～3mm，顏色為白色，邊緣整齊光滑。對5株菌進(jìn)行革蘭氏染色，均為紫色G+，YE1和YE6為圓形，PC-21、PC-24和LA62為短桿狀。依據(jù)16SrDNA全序列分析和生理生化鑒定確定菌株YE1和YE6的分類地位屬于糞腸球菌（Enterococcusfaecalis），菌株P(guān)C-21、PC-24和LA62的分類地位屬于植物乳桿菌(Lactobacil

5、lusplantarum)。
　　 (4)通過pH值、裝液量、接種量和培養(yǎng)基組份對菌株P(guān)C-21生長影響的研究表明:菌株P(guān)C-21生長的最佳pH值為6.8，最佳接種量為3％，裝液量對菌株生長的影響不大;培養(yǎng)基碳源、氮源、pH值對菌株生長的影響從大到小依次為:氮源＞碳源＞pH值，最佳培養(yǎng)基組份為蔗糖、蛋白胨、pH8。
　　 (5)對菌株P(guān)C-21轉(zhuǎn)化LA為CLA的發(fā)酵條件研究發(fā)現(xiàn):PC-21的最佳發(fā)酵底物為芝麻油;PC-2