BIP誘導調節(jié)性B細胞及其對NOD糖尿病鼠免疫功能的影響.pdf

1、目的：免疫球蛋白重鏈結合蛋白(BIP)又稱葡萄糖調節(jié)蛋白78，是熱休克蛋白70家族的成員。BIP作為分子伴侶在細胞內發(fā)揮重要作用，但是分泌型BIP也可以在細胞外發(fā)揮重要作用。分泌型BIP可以誘導自身抗體，與炎性關節(jié)炎的進展相關；但是也有報道分泌型BIP亦可以誘導具有負性調節(jié)功能的DC和T細胞，以及在RA的動物模型中可以抑制疾病的進展，然而對其誘導免疫細胞的特點及其功能尚待研究闡明。B細胞一般被認為是促進免疫反應，因為B細胞可以分泌抗體和

2、抗原提呈。但近年來，發(fā)現B細胞也具有調節(jié)功能，并且發(fā)現調節(jié)性B細胞亦可分為不同亞群，其通過不同的機制發(fā)揮調節(jié)作用。另外，許多微環(huán)境中分子和細胞因子被證明對調節(jié)性B細胞分化發(fā)育的起作用，如IL-21、IL-35、BUFF和LPS等也可以影響調節(jié)性B細胞分化發(fā)育。分泌型BIP在調節(jié)性B細胞分化發(fā)育中的作用值得研究。本論文旨在探究微環(huán)境中 BIP在調節(jié)性B細胞分化發(fā)育中的作用以及BIP處理的B細胞對NOD糖尿病鼠免疫功能的影響。
　　方

3、法：⑴通過ELISA檢測自身免疫病人血清中BIP及細胞因子的表達；⑵通過熒光抗體單標記染色流式細胞術檢測BIP誘導脾細胞表面分子的表達；⑶通過熒光抗體多標記染色流式細胞術檢測BIP誘導脾細胞多重表面分子的表達，以及細胞內分子的表達；⑷ELISA檢測BIP誘導脾細胞培養(yǎng)上清細胞因子的表達；⑸通過蛋白熒光偶聯流式細胞術檢測BIP與B細胞的結合；⑹通過磁珠分選B細胞和多色流式細胞術檢測BIP誘導調節(jié)性B細胞的表型特征；⑺通過CFSE，7-AD

4、D染色流式細胞術檢測B細胞和T細胞的增殖；⑻通過NOD糖尿病鼠模型檢測BIP處理的B細胞對NOD小鼠免疫功能的影響。
　　結果：①與正常人的血清標本比較，在類風濕關節(jié)炎病人血清中BIP水平高于正常對照組，并且BIP表達和RF，IL-10表達呈正相關；②采用流式細胞術檢測小鼠脾細胞表面分子的表達，結果顯示BIP可以誘導脾細胞表達PD-L1和FasL，并誘導CD19的表達增強；③CD19, CD5熒光抗體雙染流式細胞術檢測結果表明，B

5、IP可誘導CD19+CD5+雙陽性細胞增加；④CD19，PD-L1或PD-L2熒光抗體雙染流式細胞術分析結果表明，BIP可誘導CD19+PD-L1+雙陽性細胞增加；⑤CD19，FasL熒光抗體雙染流式細胞術分析結果表明，BIP可誘導CD19+FasL+雙陽性細胞增加；⑥采用流式細胞術和ELISA檢測小鼠脾細胞和CD19+細胞細胞因子的表達，結果表明BIP可以誘導CD19+IL-10+雙陽性細胞增加和IL-10分泌；⑦采用熒光素標記BIP

6、和流式細胞術檢測了可溶性BIP與CD19+B細胞結果表明表明大部分的CD19+細胞可以與BIP結合；⑧多色流式細胞術檢測結果表明，BIP可以誘導C57BL/6小鼠CD19+細胞中表型為CD19+CD5+PD-L1+，CD19+CD5+FasL+，CD19+CD5+IL-10+細胞擴增；⑨細胞功能檢測結果表明 BIP誘導的CD19+細胞可以促進 T細胞的增殖，提示BIP誘導的B細胞在體外可以抑制T細胞的功能；⑩BIP誘導的調節(jié)性B細胞對N

7、OD鼠胰島炎進展影響不明顯，但可以降低淋巴結中活化的CD8+T細胞的比例，其效應有待進一步研究。
　　結論：⑴BIP可以誘導表型為CD19+CD5+PD-L1+，CD19+CD5+FasL+，CD19+CD5+ IL-10+細胞擴增,表明BIP可以誘導B1a來源的調節(jié)性B細胞；⑵BIP誘導的B細胞在體外可以抑制T細胞的增殖，表明BIP誘導的B細胞在體外可以抑制T細胞的功能；⑶BIP誘導的B細胞輸注給NOD糖尿病鼠可以降低淋巴結中活