手性色譜法分離和測(cè)定一些手性藥物的對(duì)映體.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文手性色譜法分離和測(cè)定一些手性藥物的對(duì)映體姓名：曾蘇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：高分子化學(xué)與物理指導(dǎo)教師：陳耀祖范偉民19991001對(duì)映體葡醛酸化代謝的差異，本實(shí)驗(yàn)建立了RP—HPLc同時(shí)測(cè)定R()一和s一(一)普榮洛爾葡醛酸苷的分析方法并初步探討了其酶動(dòng)力學(xué)特性。色譜條件色譜柱：cB(25046mmid，5pm)，流動(dòng)相o067m01／L磷酸鹽緩沖液甲醇(55：45，pH35)，流速：10m1／min，uV檢測(cè)波長(zhǎng)：2

2、90nm，進(jìn)樣體積：20“l(fā)。測(cè)定方法取o30mJ大鼠肝微粒體孵育液，加入普萘洛爾作為底物，在37℃水浴預(yù)孵育5min，然后加入尿苷二磷酸葡醛酸(uDPGA)。37℃反應(yīng)一定時(shí)間后，加入16％三氯乙酸(TcA)75山終止反應(yīng)。加入145p∥ml對(duì)硝基苯甲酸25pl作為內(nèi)標(biāo)，混勻。離心，分離上清液，調(diào)pH至中性，HPLc分析。普萘洛爾葡醛酸苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的制各與純化以R()普萘洛爾為底物，按上述方法孵育，生物合成R()普萘洛爾葡醛酸苷。終止

3、反應(yīng)后，離心，上清液調(diào)pH至50，加二氯甲烷提取3次，水層通過(guò)c。。固相小柱分別用3m1pH59的磷酸緩沖液、23ml水洗滌，晟后用甲醇洗脫。濃縮后，作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液。R()一普萘洛爾葡醛酸苷濃度通過(guò)pD葡醛酸酶水解后，計(jì)算母體量再換算獲得。結(jié)果經(jīng)測(cè)定，R()普萘洛爾葡醛酸苷標(biāo)準(zhǔn)貯備液濃度為54OmoJ幾。微粒體中R(十)普萘洛爾葡醛酸苷的線性范圍為018～207moJ幾，以化合物濃度(mol／L)對(duì)峰面積比回歸得線性方程為Y=00772

4、8x26110‘3(Fo9991)。方法檢測(cè)限為O1pm01／L，定量限為o18mol／L，平均回收率為96256％(n=15)，日內(nèi)和日間精密度的RsD均小于10％。該方法已用于測(cè)定普萘洛爾葡醛酸化酶代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果顯示，在空白、地塞米松(DEx)和苯巴妥(PB)誘導(dǎo)的太鼠肝微粒體中，普萘洛爾葡醛酸化代謝的vm“和clint在R(十)和s(一)對(duì)映體間均有較大差異，而Km值相差不多。2D一環(huán)糊精流動(dòng)相分離s(對(duì)羥基苯基)5一苯基乙

5、內(nèi)酰脲對(duì)映體抗癲癇藥物苯妥英是一前手性藥物，在生物體內(nèi)經(jīng)氧化代謝生成5(對(duì)羥基苯基)5苯基乙內(nèi)酰脲(5一(pHydroxyphenyl)5一(phenylhydantion)，pHPPH)，pHPPH再與葡醛酸結(jié)合后排出體外。為研究p—HPPH葡醛酸化代謝是否具有對(duì)映體選擇性，本實(shí)驗(yàn)采用p環(huán)糊精(D—cD)為流動(dòng)相添加荊建立了測(cè)定人鼠肝微粒體中pHPPH對(duì)映體的HPLc方法。色譜條件色譜柱：FLccI(504ommid，lopm)，流動(dòng)