H2O2傳感器的構(gòu)建及其檸檬醛抑制黃曲霉產(chǎn)毒機(jī)理研究中的應(yīng)用.pdf

1、前期研究表明檸檬醛對(duì)黃曲霉產(chǎn)毒有著良好的抑制效果，但抑制機(jī)理仍不清楚。本實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)制備PDA-Fe3O4納米復(fù)合物，構(gòu)建H2O2無(wú)酶?jìng)鞲衅?，并利用此無(wú)酶?jìng)鞲衅鲗?shí)時(shí)監(jiān)測(cè)檸檬醛刺激黃曲霉胞外H2O2釋放的動(dòng)態(tài)變化，研究檸檬醛抑制黃曲霉產(chǎn)毒的機(jī)理。為預(yù)防以及減少糧食中黃曲霉毒素的污染提供一定的理論基礎(chǔ)和技術(shù)支撐。主要結(jié)論如下:
　　1.通過(guò)原位共沉淀成功制備了PDA-Fe3O4納米復(fù)合物，此復(fù)合物上均勻分布著單晶體磁性納米顆粒，并且通

2、過(guò)FTIR發(fā)現(xiàn)PDA-Fe3O4納米復(fù)合物保持著PDA良好的親水性。
　　2.構(gòu)建了一種新型的H2O2無(wú)酶電化學(xué)傳感器(PDA-Fe3O4-Nafion/GCE)。其檢測(cè)范圍為0.5-6.0μM，靈敏度為51.06μA/mM，檢測(cè)限為4.9×10-8M(S/N=3)，具有很好的選擇性，而且能成功檢測(cè)黃曲霉胞外釋放的H2O2。
　　3.利用HPLC檢測(cè)不同培養(yǎng)時(shí)間和不同處理?xiàng)l件下黃曲霉毒素的含量，發(fā)現(xiàn)檸檬醛對(duì)黃曲霉短時(shí)間作用和

3、長(zhǎng)時(shí)間作用都能抑制其產(chǎn)毒。
　　4.通過(guò)PDA-Fe3O4-Nafion/GCE實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)黃曲霉胞外釋放H2O2，熒光檢測(cè)相應(yīng)時(shí)間胞內(nèi)ROS水平，以及對(duì)黃曲霉形態(tài)、抗氧化酶活性、胞內(nèi)大分子（脂質(zhì)和蛋白質(zhì)）等的變化的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)檸檬醛抑制黃曲霉產(chǎn)毒與ROS密切相關(guān)。且抑制機(jī)理可以分為短時(shí)間效應(yīng)和長(zhǎng)時(shí)間效應(yīng)兩種形式。檸檬醛短時(shí)間作用黃曲霉能刺激其胞內(nèi)ROS大量向胞外釋放，使胞內(nèi)ROS達(dá)不到毒素產(chǎn)生所需的水平，從而抑制其產(chǎn)毒;而檸檬醛長(zhǎng)時(shí)間