酶蛋白非磷肽Na2SeO3的制備、表征及抗氧化功能的研究.pdf

1、從市售酪蛋白中分離提取出酪蛋白非磷肽(Casein non-phosphopeptides，CNPPs)，研究了CNPPs與Na2SeO3發(fā)生結(jié)合反應(yīng)的最佳工藝條件，制得高含硒量的酪蛋白非磷肽Na2SeO3(Casein non-phosphopeptides Na2SeO3)。采用氫化物原子熒光光譜法(Hydride generation-atomic fluorescence spectrometry，HG-AFS)、透射電鏡(Tr

2、ansmission electron microscope，TEM)和紅外光譜(Infrared Spectroscopy，IR)結(jié)果分析相結(jié)合的方法，對(duì)酪蛋白非磷肽Na2SeO3進(jìn)行了表征探究。采用總抗氧化能力(TEAC)測(cè)定的方法，對(duì)酪蛋白非磷肽Na2SeO3的抗氧化能力進(jìn)行了初步判定，并通過動(dòng)物試驗(yàn)對(duì)其抗氧化能力進(jìn)行驗(yàn)證，同時(shí)，探究了酪蛋白非磷肽Na2SeO3對(duì)小鼠體重、臟器指數(shù)和血液學(xué)指標(biāo)三個(gè)常規(guī)指標(biāo)的影響。
　　試驗(yàn)一

3、：酪蛋白非磷肽Na2SeO3的制備。選用堿性蛋白酶(Alcalase)水解酪蛋白獲得CNPPs和酪蛋白磷酸肽(Casein phosphopeptides，CPPs)的混合物，通過鈣乙醇沉淀法分離提取出CNPPs，以含硒量為參照指標(biāo)，研究了CNPPs與Na2SeO3發(fā)生結(jié)合反應(yīng)的工藝條件，先通過單因素試驗(yàn)分別確定反應(yīng)時(shí)間、溫度、pH三個(gè)因素對(duì)含硒量的最佳影響范圍，再通過正交試驗(yàn)確定最佳反應(yīng)條件為：反應(yīng)時(shí)間2h，反應(yīng)溫度60℃，反應(yīng)pH7

4、。在此條件下制得的酪蛋白非磷肽Na2SeO3的含硒量約為3.28mg/g。
　　試驗(yàn)二：酪蛋白非磷肽Na2SeO3表征的初步研究。通過觀察CNPPs與Na2SeO3反應(yīng)前后顏色變化，采用TEM結(jié)果分析以及IR測(cè)試相結(jié)合的方法，對(duì)酪蛋白非磷肽Na2SeO3進(jìn)行了表征研究。結(jié)果表明，CNPPs與Na2SeO3在加熱條件下化學(xué)鍵發(fā)生遷移，分子之間發(fā)生了重排，反應(yīng)生成的新物質(zhì)即為酪蛋白非磷肽Na2SeO3，該物質(zhì)為紅色納米級(jí)顆粒物，其直徑

5、大小保持在45nm左右。
　　試驗(yàn)三：酪蛋白非磷肽Na2SeO3抗氧化能力的研究。CNPPs與Na2SeO3反應(yīng)前后TEAC的提高率可達(dá)57.70％，可見CNPPs與Na2SeO3具有顯著的協(xié)同抗氧化能力。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)期間，每日定時(shí)定量向試驗(yàn)小鼠飼喂不同劑量的酪蛋白非磷肽Na2SeO3，根據(jù)飼喂樣品的種類和硒劑量的不同，將試驗(yàn)小鼠分為酪蛋白非磷肽Na2SeO3組(劑量適合組、劑量臨界組)、Na2SeO3組(劑量適合組)、酵母硒組(劑量

6、適合組)和常規(guī)飼料組。以Na2SeO3組、酵母硒組和常規(guī)飼料組為對(duì)照，將超氧化物歧化酶活性(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶活性(GSH-PX)、總抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛含量(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平作為試驗(yàn)指標(biāo)，研究了酪蛋白非磷肽Na2SeO3對(duì)小鼠在抗氧化能力方面的作用。結(jié)果表明：酪蛋白非磷肽Na2SeO3表現(xiàn)出比其他補(bǔ)硒試劑更為顯著的抗氧化能力，相同劑量前提下，補(bǔ)充酪蛋白非磷肽Na2SeO3的雄性小鼠血清的T-SOD

7、、GSH-Px和T-AOC三個(gè)抗氧化指標(biāo)，雌性小鼠血清的T-SOD、GSH-Px、T-AOC和GSH四個(gè)指標(biāo)都表現(xiàn)出更為顯著的差異；隨著酪蛋白非磷肽Na2SeO3劑量的增加，機(jī)體抗氧化酶的活性和抗氧化能力顯著提高。
　　試驗(yàn)四：酪蛋白非磷肽Na2SeO3影響機(jī)體補(bǔ)硒效果的研究。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)期間通過對(duì)小鼠的體重、臟器指數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白濃度(Hb)、白細(xì)胞數(shù)(WBC)、紅細(xì)胞壓積(HCT)、血小板數(shù)(PLT)幾種常規(guī)指標(biāo)的