不同特性納米系統(tǒng)應(yīng)用于內(nèi)耳給藥的體內(nèi)外攝取與轉(zhuǎn)運機制研究.pdf

1、感音神經(jīng)性聾與耳鳴、眩暈被認為是耳科學(xué)三大難治性疾病，且發(fā)病率呈增加趨勢，嚴重影響著患者的生活質(zhì)量。通過內(nèi)耳局部給藥對于內(nèi)耳疾病的治療較傳統(tǒng)的全身給藥具有顯著優(yōu)勢，但在內(nèi)耳局部給藥中，藥物傳遞系統(tǒng)的粒徑、表面化學(xué)等性質(zhì)影響著內(nèi)耳藥物分布，而且遞藥系統(tǒng)也可能引起耳蝸病變。本文通過對不同特性的納米載藥系統(tǒng)體內(nèi)外生物相容性與攝取轉(zhuǎn)運機制的研究，系統(tǒng)地比較了不同特性的納米載藥系統(tǒng)在內(nèi)耳給藥的體內(nèi)外行為，期望能為納米載藥系統(tǒng)在內(nèi)耳疾病治療中的應(yīng)用

2、提供參考與借鑒。
　　以乳酸-羥基乙酸共聚物納米粒（PLGA NPs）為模型，研究了不同粒徑的納米載藥系統(tǒng)應(yīng)用于內(nèi)耳給藥的體內(nèi)外攝取與分布行為。體外細胞毒性和攝取實驗研究結(jié)果表明，粒徑分別為<100 nm、100～200 nm和200～400 nm的PLGA NPs，對L929均無明顯細胞毒性，且都能被細胞攝取，分布于細胞核周圍；對其進行定量分析發(fā)現(xiàn)中間粒徑的攝取量最大，其次是小粒徑，再次是大粒徑，其細胞攝取率依次為99.5％、9

3、7.6%、71.9%。體內(nèi)組織相容性和分布實驗結(jié)果顯示，不同粒徑的PLGA NPs均表現(xiàn)出較好的生物相容性，且能轉(zhuǎn)運至內(nèi)耳并分布到耳蝸各個組織中，其中中間粒徑的納米粒分布量最大。
　　對中間粒徑的PLGA NPs進行不同的表面修飾，制備得到泊洛薩姆407修飾的PLGA NPs（P407-PLGA NPs)、殼聚糖修飾的PLGA NPs（CS-PLGA NPs）和單氧基聚乙二醇修飾的PLGA NPs（mPEG-PLGA NPs），并

4、對未經(jīng)修飾的和表面修飾的PLGA NPs應(yīng)用于內(nèi)耳給藥的體內(nèi)外攝取與分布規(guī)律進行了系統(tǒng)地比較。研究發(fā)現(xiàn)，未經(jīng)修飾的和不同表面修飾的PLGA NPs對L929細胞和HEI-OC1細胞均表現(xiàn)出良好的生物相容性，且都能被兩種細胞攝取，其中P407-PLGA NPs較其他納米粒在兩種細胞中均有最大攝取率（L929：96.1%；HEI-OC1：91.4%）。體內(nèi)實驗也證明未經(jīng)修飾的和不同表面修飾的PLGA NPs均具有良好的生物相容性，經(jīng)局部給藥

5、過后均能轉(zhuǎn)運進入耳蝸；且經(jīng)表面修飾的比未經(jīng)修飾的PLGA NPs分布量更大，其中P407-PLGA NPs分布量最高。在耳蝸各組織分布結(jié)果表明，未經(jīng)修飾的和表面修飾的PLGA NPs均能轉(zhuǎn)運分布至耳蝸各個組織，并且經(jīng)表面修飾的PLGA NPs均能進入到內(nèi)耳外毛細胞中，尤其是P407-PLGA NPs，熒光半定量分析結(jié)果表明其在內(nèi)耳外毛細胞中分布量分別為未經(jīng)修飾的和經(jīng)CS、mPEG修飾的PLGA NPs的1.95、1.76、1.39倍（P

6、<0.001)。
　　以殼聚糖納米粒（CS NPs）為模型，研究了不同金屬離子配合CS NPs應(yīng)用于內(nèi)耳給藥的體內(nèi)外毒性與攝取分布規(guī)律，分別為未經(jīng)金屬離子配合的CS NPs、銅離子配合的CS NPs（Cu-CS NPs）、鈣離子配合的CS NPs（Ca-CS NPs）、鋅離子配合的CS NPs（Zn-CS NPs）和鐵離子配合的CS NPs（Fe-CS NPs）。體外細胞毒性實驗結(jié)果表明，未經(jīng)修飾的和金屬離子配合的CS NPs在低

7、濃度中（﹤50μg/mL）均表現(xiàn)出良好的生物相容性，隨著濃度加大，毒性增加。體外細胞攝取實驗結(jié)果顯示，對于L929細胞，未經(jīng)修飾的和金屬離子配合的CS NPs（除Fe-CS NPs）均有較大攝取量，攝取率達90%以上；對于HEI-OC1細胞，未經(jīng)修飾的和不同金屬離子配合CS NPs均能被其攝取，且未經(jīng)修飾的CS NPs和Zn-CS NPs較其他納米粒均有更高攝取量。體內(nèi)動物實驗結(jié)果表明，未經(jīng)修飾的和金屬離子配合的CS NPs（除Ca-C

8、S NPs）均表現(xiàn)出較好的生物相容性，且均能分布到耳蝸各組織。
　　綜上所述，本研究結(jié)果表明，納米載藥系統(tǒng)的不同特性影響其體內(nèi)外生物相容性和攝取分布行為，通過調(diào)整納米載藥系統(tǒng)的特性，有利于獲得更優(yōu)的載藥系統(tǒng)。對于PLGA納米系統(tǒng)應(yīng)用于內(nèi)耳給藥，調(diào)整粒徑范圍在100～200 nm更有利于其細胞攝取，并且，通過對其表面修飾，尤其是親水性分子P407進行修飾，能顯著提高其在體內(nèi)外的攝取與分布。對于CS納米系統(tǒng)應(yīng)用于內(nèi)耳給藥，通過不同金屬