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文檔簡介
1、蝦青素是一種類胡蘿卜素,是一種極強的抗氧化劑,能夠高效率的淬滅活性氧,從而避免活性氧破壞生物體,廣泛應用于食品、醫(yī)藥、養(yǎng)殖業(yè)等方面。紅法夫酵母是生產蝦青素的優(yōu)良菌種,具有發(fā)酵周期短,易于實現高密度培養(yǎng)等特點。本文利用進化工程的方法對紅法夫酵母進行育種,篩選高產菌株。
本課題采用紅法夫酵母野生菌株As2.1557作為出發(fā)菌株,以紫外線和亞硝基胍復合誘變的方法獲得了菌種的基因多樣化文庫,以搖瓶培養(yǎng)的方式,以不同濃度的β-紫羅酮
2、、二苯胺、NaCl、TiO2、H2O2和NaClO作為進化壓力,進行進化工程培養(yǎng),轉接時間為48h。進化工程的研究發(fā)現,上述物質均能抑制紅發(fā)夫酵母的生長,從而在解除抑制后得到高生物量菌株;用β-紫羅酮和二苯胺等類胡蘿卜素抑制劑做進化壓力,對蝦青素的積累作用不明顯,而NaCl、TiO2、H2O2和NaClO等活性氧生成物則能在進化的過程中刺激蝦青素的積累。
對進化工程所得菌群進行篩選,選育出六株蝦青素高產菌株,并對其生理特性
3、進行了初步研究。研究表明,進化株的性狀得到很大改變,液體培養(yǎng)的菌液顏色由原來的橙紅色轉變?yōu)榉奂t色,且生物量提高了兩倍以上;平板培養(yǎng)的菌落和野生型相比,直徑變大,顏色由橙黃色變?yōu)榧t色,不同于野生型的扁平、粗糙干燥的菌落,進化株的菌落變?yōu)橥蛊?、濕潤稠狀,推測菌株產生了莢膜。對進化株進行顯微觀察,進化株的細胞變小、且更多以聚集在一起的形態(tài)出現,甚至出現了假菌絲。進化株的蝦青素產量也得到提高,其中蝦青素產量最高的TiO2進化所得菌株可達到1.2
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